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《乌司他丁对重症急性胰腺炎肠黏膜屏障保护作用机制的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、乌司他丁对重症急性胰腺炎肠黏膜屏障保护作用机制的研究圈囡圃甚乌司他丁对重症急性胰腺炎西安交通大学第一医院(710061)赵伟陕西省肿瘤医院(710061)邵颖西安交通大学医学院(710061)徐威西安交通大学第一医院(710061)樊林王光辉摘要目的本实验旨在通过动态观察重症急性胰腺炎小肠组织中多种细胞因子,包括:肿瘤坏死因子(TNF—a),白细胞介素6(IL-6),白细胞介素10(IL-10),细胞间黏附因子1(ICAM一1)mRNA的变化,探讨乌司他丁(ulinas.tatin,UT)对炎性细胞因子的下调作用,及其对肠粘
2、膜屏障的保护作用.方法SD大鼠40只,随机分成4组,即正常组(10只),假手术组(S0)(10只),sAP组(10只),sAP+UT组(10只),建立假手术组,重症急性胰腺炎及治疗组模型.术后3h,6h,12h,24h应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检0TNF—a,IL一6,IL一10,CAM一1mRNA的表达,以及相应时段小肠组织NF-KB及血液中DAO的表达.结果sAP组大鼠肠黏膜TNF—a,IL一6,IL-10,ICAM-1mRNA表达较S0组增高,其中TNF-ctmRNA表达于术后6h达峰值,ICAM-1表达于
3、术后12h达峰值,IL-6,IL-10术后6小时表达增加,且随着时间的延长表达量增加,U1'治疗组TNFa,IL一6,IL一10和ICAM一1表达均显着下调P<0.o5.s0组大鼠肠黏膜少见NF-KB活化的细胞,而sAP组大鼠术后3h肠黏膜即出现大量核内NF—KB染色阳性细胞,UT治疗组肠黏膜NF—KB活化细胞明显少于LP组.结论乌司他丁可以显着降低SAP组大鼠小肠NF—KB的表达以及细胞因子mRNA的表达,抑制炎症反应,从而起到保护肠黏膜屏障的作用.关键词胰腺炎乌司他丁肠黏45『20o6.7膜屏障细胞因子重症急性胰腺
4、炎(severeacutepan-creatitis,SAP)并发感染所导致的全身炎症反应综合征(SIRS)和多器官功能障碍综合征(MODS),是导致患者死亡的重要原因.动物实验和临床研究表明,肠道细菌移位是胰腺炎发生感染的主要来源【】12].乌司他丁(ulinastatin,U-I.)即尿胰蛋白酶抑制剂,来源于人尿中分子量为6700的糖蛋白,除了抑制以胰蛋白酶为主的多种酶活性之外,还有抗休克,抗胰腺炎等作用.乌司他丁作为蛋白酶抑制剂具有抑制外周血多形核白细胞和抗炎症介质作用.近年来乌司他丁作为胰腺炎治疗的一线药物已被广泛认
5、可,但其对肠黏膜屏障的保护作用机制还不十分清楚,相关研究较少.1.材料与方法1.1实验动物分组及模型的建立健康雄性SD大鼠(清洁级)40只(西安交通大学医学院动物中心提供)随机分为4组:①正常组:10只,剖腹后取门静脉血.②假手术组(SO):10只,胰管逆行注射生理盐水lml/kg,关腹后背部皮下注射生理盐水20rnl/kg.③胰腺炎组(SAP):10只,胰管逆行注射4%牛碘胆酸钠.④治疗组(SAP+UT):10只,制作胰腺炎模型后,门静脉注射乌司他丁10000u/kg.模型建立:2%戊巴比妥钠40mg/ks麻醉后,用银夹夹
6、闭胰管近端处,从胰管近端逆行注射4%牛磺胆酸钠lml/kg,0.2ml/min,2min后松开银夹,关腹后背部皮下注射生理盐水10mg/kg.1.2指标检测1.2.1RNA的制备和RT—PCR检测细胞因子表达应用TRIZOL试剂(GIB-COBRL公司)提取肠组织总RNA.取1gRNA用于逆转录反应合成cDNA,再将cDNA用于PCR(反应试剂盒购置GIBCOBRL公司),以[3-actin为内参.各目标基因引物序列及PCR条件见附表1.取101~1PCR产物在1.2%琼脂糖凝胶上电泳,拍照,凝胶成像仪上定量,计算各目标片段
7、与内参的比值.1.2.2病理学观察大体标本的观察,胰腺,回肠石腊切片,HE染色后光镜下观察组织学变化.1.2.3NF-KB在小肠组织的表达上述各组于模型制作成功后,分别于3h,6h,12h,24h取小肠组织进行免疫组化检测.以每个高倍视野中阳性细胞表达百分数作为指标,每张切片取5个视野,计算平均值,来评价NF—KB的表达水平.1.2.4血浆二胺氧化酶的检测取腹主动脉血浆,采用分光光度计法检测DAO的活性[31.1.2.5统计学处理使用SPss12.0软件,NF-KB及DAO的表达差异采用单因素分析的q检验进行分析,P<
8、0.o5具有统计学意义.2.结果2.1胰腺及小肠(回肠)组织学2-重症急性胰腺炎胰腺组织结构破坏,有大片出血坏死灶,大量炎细胞浸润.胰周脂肪组织出现坏死,可形成皂化斑;肠黏膜间质水肿,大量炎性细胞浸润,小肠绒毛水肿,脱落,黏膜层与基底层分离.UT治疗组胰腺组织炎性细胞浸润减少,间质水肿,坏
