骨肉瘤中血管内皮生长因子受体kdr的表达及其分析论文

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1、骨肉瘤中血管内皮生长因子受体KDR的表达及其分析论文廖博，马保安，刘吉吉，范清宇【关键词】骨肉瘤Expressionofvascularendothelialgroicrovesseldensity【Abstract】AIM:Toexploretheexpressionofvascularendothelialgroicrovesseldensity(MVD).METHODS:CD34andKDRensfrom102osteosarapatients.MVDinedayberelatedtooeteosara.【Key,vascula

2、r;microvesseldensity【摘要】目的：研究骨肉瘤中血管内皮生长因子受体（VEGFR2）KDR的表达情况，及其与微血管密度（MVD）关系.方法：对102例骨肉瘤患者的病理标本应用CD34，KDR对其组织切片分别进行免疫组化染色，双盲计数法进行热点内血管测定MVD.结果：骨肉瘤KDR在血管周围的肿瘤细胞质呈较强阳性表达，在部分血管内皮细胞质内表达呈弱阳性.freel，≥10cm57例，10cm45例.②试剂：兔抗人KDR蛋白多克隆抗体为美国SantaCrazBiotechnologyInc产品，兔抗人CD34多克隆抗体、S

3、ABC试剂盒、DAB显色试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司.1.2方法1.2.1免疫组化实验测量切片常规脱蜡至水，30mLL-1H2O210min灭活内源性过氧化物酶，微波修复，正常山羊血清封闭，抗体工作浓度为1∶100，滴加KDR多克隆抗体4℃过夜，依次滴加生物素化羊抗兔IgG,SABC.DAB显色，苏木素复染，脱水、透明、封片.以PBS代替第1抗体作为阴性对照，阳性对照采用已知的KDR阳性的标本切片.胞核或胞质染成棕黄色为阳性.1.2.2图像分析用多功能真彩色病理分析系统，分别测定肿瘤细胞和血管内皮细胞质表达的平均吸光度值，取其

4、均值作为各自KDR蛋白表达的相对含量.1.2.3MVD测定按VD计数结果为42±6(3～63).2.3骨肉瘤组织中KDR与MVD表达的关系在78例KDR表达阳性组中，MVD计数为46±9；24例KDR表达阴性组中，MVD计数为37±4，两组之间有显著性差异(P0.05)，说明KDR表达与肿瘤血管密度相关.3讨论KDR是VEGF主要受体之一，酪氨酸激酶第Ⅲ亚型,胞外含7个免疫球蛋白区域.有报道表明，KDR胞外Ig样domain2属VEGF结合区，而domain1和domain3对受体与配基的结合起一定作用，domain4能维持受体的二聚

5、体化.目前已经公认，VEGF对内皮细胞的增殖、分化作用是由KDR介导的.KDR介导的信号转导的主要过程是：VEGF结合到KDR胞外区的Ig结构域上，引起KDR胞内激酶区特定酪氨酸残基的交叉磷酸化而活化.活化的受体进而被含有SH2结构域的适配分子（adaptor）如Grb2等结合，通过一系列生化级联反应，活化MAPK.MAPK作为转录因子可转运至细胞核内，启动特定基因的表达，完成VEGF相应的促增殖作用［4］.在脑胶质瘤、脑膜瘤和乳腺癌等多种肿瘤组织中KDR的表达上调.一般认为，KDR可特异性地表达于肿瘤的血管内皮细胞.本实验结果证实K

6、DR可在骨肉瘤组织中血管周围的肿瘤细胞质呈较强阳性表达，在部分血管内皮细胞质内表达呈弱阳性，这与以往VEGF在骨肉瘤组织中表达情况的研究基本一致［5］.VEGF可诱导内皮细胞分裂及细胞运动，影响内皮细胞的基因表达，降解基底膜，促进血管生成，增加血管的通透性，是骨肉瘤迅速生长、转移，恶性度高的机制之一.本结果提示KDR则是VEGF在骨肉瘤形成发展中的重要步骤.KDR在肿瘤细胞中的表达显著强于血管内皮细胞，提示除了诱导血管形成外，可能还具有其他作用，尚需进一步实验验证.此外，KDR表达阳性组的MVD明显高于VEGF表达阴性组，两者之间有显

7、著性差异.KDR表达阳性者，其MVD值也高，显示两者成正相关.这提示VEGF可能通过KDR促进肿瘤血管生长，增加血管通透性，影响骨肉瘤的生物学特性.同时，MVD已经实验证实与骨肉瘤的恶性程度有关，并作为骨肉瘤预后的指标［6,7］.KDR与MVD表达的平行性，提示KDR也可对判定骨肉瘤的预后提供参考.肿瘤细胞和血管是密切相关的系统，内皮细胞可能由来自肿瘤细胞所发出的信号激发，从休眠期转至快速生长期，血管大量生成，为肿瘤细胞的生成、转移提供物质基础和途径.当对肿瘤的血管生成抑制时，肿瘤的生长受到抑制，肿瘤的转移机会也随之降低，从而达到治疗

8、肿瘤、提高患者生存率的目的.因此，通过抑制KDR的表达来降低VEGF的作用，抑制肿瘤血管增殖，也为临床治疗骨肉瘤提供了思路.【