无筛板型固相萃取柱的制备及其在食品中苯甲酸的测定研究论文

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1、无筛板型固相萃取柱的制备及其在食品中苯甲酸的测定研究论文宋文青刘亚雄王琴包建民【摘要】结合固相萃取(SPE)盘与含支撑物的SPE柱技术，制备了一种新型的无筛板型固相萃取柱。以C18填料为例，以话梅样品为介质对其中的苯甲酸进行分析，并用传统固相萃取小柱平行比较;将SPE与HPLCUV结合，考察了填料对简单介质中苯甲酸的最大吸附量及洗脱曲线，研究了新型SPE柱在实际应用中的分离纯化效果。结果表明，新型SPE柱对样品的吸附效果更好，规格为200mg/3mL的SPE柱对苯甲酸的吸附量达到0.951mg.freelg;

2、其洗脱曲线与传统柱几乎重合;苯甲酸在1～100mg/L浓度范围内线性关系良好，r=0.9999，用此SPE柱纯化后的样品加标回收率和相对误差分别在88.4%～102.3%和1.4%～2.9%之间。【关键词】固相萃取柱，筛板，填料，苯甲酸1引言固相萃取(SPE)是一种试样预处理技术，由液固萃取和液相色谱技术相结合发展而来1。作为液体试样制备方法，SPE优于传统的液液萃取法(LLE)，如无乳化现象;不需要使用超纯溶剂，有机溶剂消耗低，对环境污染小;适用于小体积试样;处理样品速率快，尤其适于处理挥发性及对热不稳定药物

3、2,3。SPE柱是SPE最普通的使用形式，一般的SPE柱是在类似于注射筒的塑料或玻璃柱管中填装适量的填料，上下各加一片聚乙烯筛板为支撑体4。这种筛板在使用中会产生诸如非特异性吸附和通道效应等问题，影响了萃取效率。SPE盘是SPE的另一种形式。它是通过选择性质稳定、粘合性好的特定的固化剂，将其与SPE吸附剂相互混合，用特殊的工艺压制成坚固的圆片。由于吸附剂被固化剂紧密地粘合在一起，减少了吸附剂之间的死体积，在萃取时无通道效应，因而萃取效率得到提高5,6。这种盘片一般适用于处理较大体积的液体，但是由于该膜片无支撑体

4、，使用范围受到了限制。本研究在现有SPE盘技术的基础上，将另一种含支撑体系的SPE柱技术的思想与之结合，把填料和支撑物用粘合剂进行固化，制得一种新型整体性填料。利用此填料开发了一种全新的无筛板SPE小柱并对其各项性能和指标进行了系统的评价。苯甲酸作为常用的防腐剂广泛存在于食品中，国家对其使用有严格的限量标准，过量使用会对人体产生危害，因而对存在于食品中的苯甲酸的检测是非常必要的7,8。本研究选取存在于不同介质中的苯甲酸作为样品，评价了此种新型SPE小柱的色谱能力。无筛板SPE的最大优势表现为：无需多孔筛板的支撑

5、，避免了筛板的非特异性吸附，提高了分离效率和回收率;所利用的惰性材料减少了SPE上样过程中的多通道沟流效应，提高了分离效率和载样量;适用于比常规SPE填料小得多的超细填料。2实验部分2.1仪器与试剂XL30环境扫描电镜(Philips公司);1100高效液相色谱仪(安捷伦公司);QT6150超声机(天津市瑞普电子仪器公司);5415c离心机(EppendorfCentrifuge);传统和新型的SPE小柱均由天津奥秘科技有限公司提供。苯甲酸(99%，天津一方科技有限公司);乙酸铵、甲苯、丙酮、二氯甲烷均为分析

6、纯，甲醇为色谱纯(天津大学科威公司);水为去离子水;九制话梅由商店购得。2.2色谱条件FujiC18色谱柱(150mm×4.6mm，5μm，天津市三维色谱仪器配件厂);流动相：V(甲醇)∶V(0.02mol/L乙酸铵)=10∶90;流速：0.8mL/min;检测波长：230nm;进样量：20μL。2.3实验方法2.3.1碳十八烷基填料的键合9取硅胶10.0g，用6mol/LHCl进行酸洗后，抽吸过滤，蒸馏水洗至洗出液呈中性，烘干。将处理好的硅胶放入三口烧瓶中，固定在油浴上，右侧接滴液漏斗，内装十八烷基三氯硅烷

7、13.6mL和甲苯20.0mL，漏斗上端封闭，左侧接真空泵。开启真空泵抽真空2h，使油浴温度控制在150℃。加热完毕后，待油浴温度降至50℃左右，关闭真空泵，边搅拌边缓慢加入硅烷化试剂和甲苯混合液，右侧加入0.5mL三乙胺后，左侧立刻通入N2，右侧连接冷凝装置，启动加热开关，控制反应液温度130℃，连续回流反应3h。冷却至室温。抽滤，依次以甲苯、甲醇、二氯甲烷洗涤硅胶2次，最后用丙酮洗涤抽滤，将硅胶放入电热真空干燥箱(80℃，0.04MPa，3h)，冷却至室温即得产品。2.3.2新型填料的制备及表征取适量C18

8、填料，依照不同产品性能的要求调整不同比例(如20%～30%)结构性添加物的复合粘合剂，在充分混匀后，加压成型，即可得此具有整体性的填料。将两种填料彻底干燥后进行电镜扫描，可看出表面结构的差异，放大倍数为100倍。2.3.3填装传统固相萃取是时将填料装填在两个挡板之间，而新型固化填料无需挡板，直接装填压匀即可使用。每种小柱都分别装有200mg/3mL，500mg/6mL两种规格。2.3.