急性白血病患者lrp、gstπ、mrp1蛋白表达及临床意义论文

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1、急性白血病患者LRP、GSTπ、MRP1蛋白表达及临床意义论文黄彬涛肖镇石玉涛哈森赵卫红高大阎晓红杨宏新【摘要】本研究探讨谷胱甘肽硫转移酶π（GSTπ）、多药耐药相关蛋白1（MRP1）、肺耐药相关蛋白（LRP）与急性白血病（AL）多药耐药（multidrugresistance,MDR）的关系、并探讨这3种耐药蛋白表达的相关性以及三者表达与AL患者临床特征的关系。采用免疫组织化学SP法检测80例AL患者及30例正常人GSTπ、MRP1及LRP的表达。结果表明：GSTπ,MRP1,LRP蛋白表达均与临床耐药相关，3种耐药蛋白表达阳性组的

2、完全缓解率均低于阴性组，提示耐药蛋白表达时白血病患者预后不良。GSTπ、MRP1在AL难治组中的表达具有高度相关性。结论：GSTπ/MRP1二者联合检测对评定白血病预后不良较单独测定某一蛋白更具有显著的临床意义。当外周血白细胞数≥10×109/L时，LRP阳性表达率显著增高，提示LPR对高白细胞数白血病患者的耐药性和预后评定具有很高的判断价值。【关键词】急性白血病；谷胱甘肽硫转移酶π；多药耐药相关蛋白；肺耐药相关蛋白；多药耐药ExpressionsofLRP，GSTπandMRP1inAcuteLeukemiaPatientsandItsC

3、linicalSignificanceAbstractThisstudyultidrugresistanceprotein1(MRP1),lungresistanceprotein(LRP)ultidrugresistanceofacuteleukemia(AL),thecorrelationbetmunohistochemicalstainingmethodinetheexpressionsofGSTπ，MRP1andLRPproteinsin80ALpatientsand30normalsubjectes.Theresultsshooth

4、erapyresistance,meanaybeaccountedforpoorprognosis.ThereinationofGSTπandMRP1hasgreatersignificancethanexaminationofonekindofproteininevaluatingpoorprognosisofleukemiapatients.LRPproteinexpressionincreaseobviouslyiapatientsia;GSTπ;LRP;MRP1;multidrugresistance化疗是目前治疗急性白血病（AL）主要

5、的手段，其中存在的关键问题是肿瘤细胞对化疗药物产生抗药性.freell，加入肝素盐水溶液1ml（250U/ml）抗凝，向抗凝血中加入等体积的Hank缓冲液(pH=7.4)，血标本缓慢置于等体积的人淋巴细胞分离液，离心机离心，吸管抽取有核细胞层悬液，反复加入Hank缓冲液，纯化有核细胞悬液，用血细胞计数板计数悬液中的细胞数，调整细胞浓度为(1-2)×106/ml。离心涂片机涂片，丙酮液固定，将涂片置于-20℃冰箱冷冻保存。外周血有核细胞涂片的免疫组织化学SP检测法［4］每张涂片加50μl过氧化物酶阻断液，室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶活

6、性。用PBS缓冲液冲洗，加50μl正常非免疫动物血清，室温下孵育10分钟。每张涂片滴加50μl单克隆一抗（抗Pgp、LRP、Bcl2抗体），以PBS液替代一抗作为空白对照，4℃冰箱存放过夜。PBS缓冲液冲洗，每张涂片滴加50μl生物素标记的第二抗体，室温下孵育10分钟。PBS缓冲液冲洗3次，每张涂片滴加50μl链霉素抗生物素过氧化物酶溶液，室温下孵育10分钟。PBS缓冲液冲洗，每张涂片滴加100μl新鲜配置的DAB溶液。显微镜下观察细胞着色情况3-10分钟。自来水冲洗，苏木素复染5分钟，PBS缓冲液冲洗返蓝，经梯度乙醇脱水后中性树胶封片。结果判

7、定高倍（×1000）显微镜下对每张涂片计数500个有核细胞，以GSTπ阳性细胞百分率＞2%判断为GSTπ表达阳性［5］。以MRP1阳性细胞百分率＞3%判断为MRP1表达阳性［6］，LRP阳性着色细胞占计数细胞的百分率≥15%为蛋白表达阳性［7］。GSTπ表达阳性细胞在胞浆出现棕黄色着色，MRP1阳性细胞胞浆和（或）胞膜出现棕黄色着色，LRP阳性表达标志是细胞浆呈棕黄色颗粒［8］。统计学分析应用统计软件SPSS10.0对计数资料采用χ2检验、四格表精确概率法进行数据分析，以直线相关法分析耐药蛋白阳性率之间的相关性，双侧P≤0.05为统计学显著性

8、差异，双侧P≤0.01为统计学极显著性差异。结果GSTπ、MRP1和LRP的表达结果见表1。采用精确概率法计算3种耐药蛋