天参益智方对老年性痴呆模型大鼠神经细胞凋亡的抑制作用论文

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1、天参益智方对老年性痴呆模型大鼠神经细胞凋亡的抑制作用论文【摘要】目的研究天参益智方（TSYZ）对AD模型大鼠神经细胞凋亡的抑制作用和抗氧化作用。方法以慢性铝中毒法复制老年性痴呆模型大鼠，用TUNEL法观察模型大鼠海马和皮质内细胞凋亡水平，并检测脑线粒体超氧化物歧化酶（SOD）活性以及丙二醛（MDA）含量。结果模型组大鼠海马和皮质具有典型的细胞凋亡特征，T-SOD活性降低，MDA含量升高；而天参益智方治疗组海马和皮质神经细胞凋亡数减少，T-SOD活性升高，MDA含量降低(P0.05或P0.01)。结论天参益智方具有明显抑制神经细胞凋亡作用和抗氧化作用，其改善AD

2、大鼠学习记忆功能可能是通过多个环节整体治疗来实现的。【关键词】天参益智方老年痴呆细胞凋亡超氧化物歧化酶丙二醛Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofTSYZformulaonneuronalapoptosisandanti-oxidationofageddementiamodelmice.MethodsTheageddementiamodelsi.gAlCl3.TUNELarkedlycausedinmodelgroup,meanarkably.TheTSYZformulagroupsobviouslyinhibitedneur

3、onalapoptosis,increasedtheactivityofSODandloulaonneuronalapoptosisandanti-oxidationareremarkable.ThemachanismsmaybethattheprotectiveeffectsofTSYZformulaontheabilityoflearningandmemoryofADmodelmice.Keyula;Ageddementia;Neuronalapoptosis;SOD；MDA老年性痴呆（Alzheimer'sdisease,简称AD）是一种严重影响老年人身

4、心键康的.freelias99图象分析系统（四川大学图象图形研究所产品）；EG1160石蜡包埋机(德国Leica公司生产)；RM2145轮转切片机(德国Leica公司生产)；HI1210摊片机(德国Leica公司生产)；721分光光度计（上海第三分析仪器厂）；XH-B漩涡混匀器（江苏康健医疗用品有限公司）；HH-2数显恒温水浴锅（金坛市富华仪器有限公司）；三氯化铝（AlCl3·6H2O）（分析纯，上海盛龙化工有限公司生产）；脑复康(杭州民生药厂生产)；TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒、即用型SABC、DAB显色试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司产品）；SOD试剂

5、盒、MDA试剂盒（南京建成生物工程有限公司产品）2方法2.1痴呆模型建立［2～4］，实验分组及药物治疗SD健康大鼠60只，随机分为正常对照组（n=10）和模型组（n=50）。模型组给AlCl3溶液，第1个月和第2个月按500mg·kg-1·d-1灌胃，以后一直自由饮用1.6g·L-1AlCl3溶液；正常对照组灌胃等容的蒸馏水，用水迷宫法检测其记忆改变情况。痴呆模型建立成功之后，模型组随机分为5组，每组10只，即脑复康组，天参益智方高、中、低剂量组和痴呆模型组，以上药量均配成0.6ml液体灌胃给药,连续3个月，正常对照组、痴呆模型组灌以等体积的蒸馏水。整个实验过

6、程避免与铝制品接触。2.2标本制备水迷宫测试结束24h后，大鼠断头取脑，用10%中性缓冲液福尔马林固定4h以上，石蜡包埋作连续冠状切片，片厚5μm。2.3神经细胞凋亡在海马和皮质的表达每个标本随机选取1张切片，切片常规脱蜡、脱水后，进行TUNEL染色：3%H2O2阻断10min,用蛋白酶K处理后加入地高辛标记的dUTP,在末端转移酶的作用下反应120min,.freelin,最后DAB显色。凋亡的细胞呈黄色，为阳性细胞［5，6］。每张切片随机选取5个视场，视场面积为443268μm2，每个视场选取5个阳性表达区域，在400×倍光学显微镜下，通过Biomias9

7、9图像分析系统，检测平均灰度值，并用鼠标点击法计数阳性表达细胞，检测大鼠海马和皮质内细胞凋亡水平。2.4脑系数及脑线粒体SOD活性和MDA含量的测定水迷宫测试结束24h后，处死大鼠，于冰浴中迅速取出脑组织，并精确称取，分别采用黄嘌呤氧化酶法测定SOD、硫代巴比妥酸（TBA）化学比色法测定MDA和考马斯亮兰法测定蛋白含量，具体按试剂盒说明操作。同时，按下列公式计算脑系数。脑系数(%)=脑湿重/g体重kg×100%2.5数据统计数据处理采用±s表示，组间均数比较采用单因素方差分析检验。3结果3.1天参益智方对老年性痴呆模型大鼠海马和皮质神经细胞凋亡的影响TUNEL

8、法检测神经细胞结果表明：与正常组比较，