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《补肾醒脑方对实验性血管性痴呆大鼠脑神经细胞凋亡的影响论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、补肾醒脑方对实验性血管性痴呆大鼠脑神经细胞凋亡的影响论文.freelechanismofvasculardementia(VD)ratsandstudytheeffectofBushenxingnao(BSXN)prescriptiononcerebralneurocyteapoptosis.MethodExperimentalVDmodelratsinecerebralneurocyteapoptosisia-refusion.ConclusionBSXNprescriptioncanrepresscer
2、ebralneurocyteapoptosis,toabateitsexcitatorynerotoxicity,toprotectcerebralneurocyte,aybeoneofthemechanismsoftotreatingthelesion.Keyentia；situnick-endlabeling；apoptosis；rat血管性痴呆(vasculardementia,.freelL)、低剂量(1.5g/mL)的浓缩液。无菌条件装瓶,置4℃冰箱保存备用。喜得镇,天津华津制药厂与北京诺华制药有
3、限公司合作生产,批号030212,用生理盐水配制成0.03mg/mL的药液备用。硝普钠粉针剂,50mg/支,北京双鹤现代医药技术有限公司生产,批号0302162,用5%葡萄糖注射液配制成0.25mg/mL的药液,黑纸包裹避光保存备用。水合氯醛,上海五联化工厂生产,批号20020418,用生理盐水配制成100mg/mL的药液备用；亚硝酸钠,天津市四通化工厂生产,批号20020710；无水乙醇,郑州化学试剂二厂生产,批号030812；多聚甲醛,天津市博迪化工有限公司生产,批号2001920；原位末端标记检测凋亡
4、试剂盒(TUNEL),法国博士德公司产品。1.3仪器轮转式切片机,德国Leitz2145；BX60研究用万能显微镜,日本OLYMPUS公司。2实验方法2.1动物分组动物购入后随机分为5组：模型组(MX组)、假手术组(JS组)、喜德镇组(XD组)及补肾醒脑高(BH组)、补肾醒脑低剂量组(BS)。每组按1、24h分别再分2组,每组10只,每笼5只喂养。大鼠自由觅食饮水,在室温22～25℃、相对湿度40%～50%的环境中喂养3d,待大鼠适应环境后开始实验。2.2给药JS、MX组：生理盐水ig,1mL/100g,1
5、次/d；XD组：喜德镇ig,1mL/100g,1次/d(0.6mg/kg,相当于正常成人用量的20倍)；BH组：补肾醒脑方(3g/mL)ig,1次/d(30g/kg,相当于正常成人用量的20倍)；BS组：补肾醒脑方(1.5g/mL)ig,1次/d(15g/kg,相当于正常成人用量的10倍)。2.3造模灌胃第7日给药后1h,将大鼠用10%水合氯醛(350mg/kg,腹腔注射)麻醉后仰卧固定在手术台上,常规消毒,颈正中切口,分离双侧颈总动脉,穿线备用。同时腹腔注射硝普钠(3.5mg/kg)造成低血压,随即用无创
6、动脉夹关闭双侧颈总动脉10min后,再通10min,反复3次,再通后缝合伤口,放回笼中保温饲养。次日继续灌胃,给药3h后,大鼠断头处死取脑。假手术组只分离颈总动脉,腹腔注射硝普钠,不进行缺血再灌注手术。2.4脑神经细胞凋亡检测2.4.1取材方法分别于造模后1、24h断头处死大鼠,在冰盘上迅速剥离取脑,切取左侧大脑组织,立即放入4%多聚甲醛溶液中,固定24h后取出,改刀成1mm3的组织块,室温下70%、80%、95%、100%乙醇梯度脱水,二甲苯透明2次,用54℃低熔点石蜡浸蜡2次,石蜡包埋。5μm常规切片,
7、苏木素-伊红(HE)染色,供原位末端标记(TUNEL)检测法使用。2.4.2脑神经细胞TUNEL检测细胞凋亡方法石蜡切片厚度5μm,裱于用多聚赖氨酸处理过的载玻片上,置入45℃温箱烤片24h；切片常规脱蜡至无水；磷酸缓冲液(PBS)0.01mol/LpH7.4,冲洗2次,5min/次；滴加蛋白酶K,消化5min,PBS冲洗2次,5min/次；吸干切片周围水分,滴加0.3%过氧化氢溶液,室温15min,以封闭内源性过氧化物酶活性,PBS冲洗2次,5min/次；吸干切片周围水分,滴加末端标记酶,置湿盒内37℃水
8、浴1h,PBS冲洗3次,5min/次；滴加抗荧光素抗体,置湿盒内37℃水浴1h,PBS冲洗3次,5min/次；二氨基联苯胺(DAB)显色10min,蒸馏水洗；苏木素复染10min,蒸馏水洗；常规脱水,透明,树脂胶封片,光学显微镜下观察。2.4.3观察方法每张切片分别选取互不重叠的6个(20×10)视野,计数TUNEL染色阳性细胞数进行分析,显微镜下胞浆或胞核有深棕色颗粒者为阳性细胞,染色越深,阳性细胞数越多即阳性
