腹腔镜检查结合rt-pcr在胃癌诊疗中的临床意义

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1、腹腔镜检查结合RT?PCR在胃癌诊疗中的临床意义【摘要】目的：探讨进展期胃癌术前腹腔镜检查与RT?PCR检测腹腔灌洗液中游离癌细胞CEAmRNA的表达水平，在胃癌患者术后微转移及预后的临床意义。方法：对22例进展期胃癌患者术前行腹腔镜探查，灭菌生理盐水冲洗腹腔4～5次，收集脱落细胞，进行细胞学检查和RT?PCR检测CEAmRNA表达水平。结果：22例胃癌患者中，细胞形态学检测31.8%（7/22）阳性，RT?PCR检测54.5%(12/22)CEAmRNA阳性表达，二者阳性率有显著性差异(P＜0.05)。结论：诊断性腹腔镜检查、RT?PCR与PLC有效结合，可提高腹腔转移复发诊断的灵敏

2、性和特异性，有助于对胃癌分期、淋巴转移和预后的综合判断，对胃癌的辅助治疗提供依据。【关键词】腹腔镜检查胃肿瘤游离癌细胞RT?PCR　　Theclinicalsignificanceoflaparoscopybinedadiagnosisandtherapy　　【Abstract】Objective:ToexploretheclinicalvalueofpreoperativelaparoscopyofprogressivegastriccancerbinedonitoringofCEAmRNAexpressionofperitoneallavagefluid(PLF)inmicrome

3、tastasisandprognosisofpostoperativepatientsinated22patientsinalcavityes,andcollectedperitonealfreecellsdetectedbycytologyandRT?PCRanalysis.Results:Theoverallpositiverateofcytologyprovediagnosticspecialtyandsensitivityofperitonealmetastasis.Itisconducivetoprehensiveevaluationofgastriccancerstagin

4、g,lymphnodemetastasisandprognosis,a;Freecancercells;RT?PCR　　胃癌在我国的患病率和死亡率均居恶性肿瘤前列，手术是最有效的治疗方法，但半数以上的患者术后复发转移，从而导致手术失败。腹腔游离癌细胞(freecancercells，FCC)在腹腔内形成肉眼或HE染色均不能发现的微转移灶是胃癌复发的重要原因。Nakanishi等［1］提出侵及浆膜层的肿瘤细胞易于脱落的原因与肿瘤细胞缺乏CD44和β?intergin粘附分子表达有关，IFCCs在腹腔细胞刺激因子作用下，生物活性增高，侵及腹膜下组织形成微小转移灶，致术后转移扩散。本研究首次

5、运用腹腔镜的微创伤性、RT?PCR的特异性和灵敏性检测腹腔灌洗液(peritoneallavagefluid,PLF)中游离癌细胞及其CEAmRNA表达水平，明确胃癌腹腔转移的形成机制，为胃癌的临床诊疗提供依据。　　1资料与方法　　1.1试剂与设备RT?PCR试剂、琼脂糖、DNAMarker、DEPC水、Taq酶购自上海生工；CEA(p15'?gagcgaacctcaacctctcctgccact?3';p25'?tgtagctgttgcaaatgctttaaggaagaagc?3',367bp)引物由上海博亚合成；TRIzol试剂购自Invitrogin公司；腹腔镜、离心机、5700

6、PCR扩增仪、超低温冰箱、电泳仪、凝胶成像系统。　　1.2手术方法　　1.2.1细胞的收集自2005年3月至2007年6月收集我院对22例进展期胃癌患者行腹腔镜探查的临床资料，男12例，平均(56.5±6.2)岁，女10例，平均(60±5.6)岁，用腹腔镜技术进行腹腔灌洗，用42℃、300ml灭菌生理盐水冲洗胃床、腹腔，吸尽冲洗液，加入EDTA抗凝剂，3000转/min离心10min，弃上清，部分脱落细胞固定HE染色，由两位细胞学医师盲法随机阅片，做出诊断。另部分沉淀脱落细胞迅速置于超低温冰箱用于mRNA提取。　　1.2.2总RNA提取Trizol体系提取总RNA。提取的RNA用0.1

7、%DEPC水溶解，紫外分光光度仪检测RNA样品的OD260nm/OD280nm比值，得到RNA浓度，然后置于-80℃保存或立即检测。　　1.2.3RT?PCR1μg总RNA、1μlMMLV、7μl逆转录反应体系、1μlantisenseprimerP1、去Rnase水补至20μl，快速离心混匀，37℃1h,95℃10min灭活MMLV，快速离心使沉于底部。PCR反应19μlPCR反应体系、1μlSenseprimerp2、58μl超净水,快速离