苦荞籽壳中黄酮类化合物的定性定量研究论文

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1、苦荞籽壳中黄酮类化合物的定性定量研究论文.freelg·mL-1范围内线性关系良好，平均加样回收率99.7%，RSD为0.21%。结论:色谱分离良好，斑点清晰可见，提示该方法简便可行，准确度和精密度均能满足分析要求。【关键词】苦荞籽壳;黄酮类化合物;定性分析;定量分析;薄层色谱法;紫外分光光度法苦荞麦为蓼科荞麦属植物，别名乌麦、花荞等。《本草纲目》记载:苦荞麦性味苦、平、寒.freela进口分装;槲皮素对照品:中国药品生物制品检定所;其余试剂均为分析纯。1.3样品的制备准确称取苦荞籽壳粉碎样5g，滤纸包好，放入索氏抽提器，加入70%乙醇300mL抽提至回流液无色，过滤提取液，减压蒸馏

2、至无醇味后，用乙醚萃取3次，萃取液旋转蒸发浓缩至剩少量液体后冷冻干燥，得黄绿色粉末（为苦荞黄酮提取物）。所有溶剂都要经过脱气处理。2定性鉴别2.1溶液的配制2.1.1对照品溶液分别称取芦丁和槲皮素对照品适量，甲醇溶解，制成浓度为2mg·mL-1的对照品溶液。2.1.2供试品溶液取“1.3”项下苦荞黄酮提取物5mg，置25mL容量瓶中，加甲醇适量，振摇使完全溶解并定容至刻度，作为供试品溶液待用。2.1.3阴性对照液取不含芦丁和槲皮素的提取物，按“2.1.2”项下方法制成阴性对照液。2.2薄层色谱照薄层色谱法（中国药典2000年版一部附录VIB）分别吸取芦丁和槲皮素对照品溶液、供试品溶液

3、、阴性对照液4种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯甲酸蒸馏水（8:3:1）为展开剂，展至薄膜上边缘约0.5cm处，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇溶液，待乙醇挥干后，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照色谱无相同斑点显现。3总黄酮含量测定3.1溶液的配制3.1.1对照品溶液精密称取芦丁对照品（120℃干燥至恒重）10.8mg，甲醇溶解完全后，移入50mL容量瓶中，用甲醇定容，配成浓度为0.216mg·mL-1的对照品溶液。3.1.2供试品溶液取“1.3”项下苦荞黄酮提取物10mg，置250mL容量瓶

4、中，加甲醇适量，振摇使完全溶解并定容至刻度，作为供试品溶液待用。3.1.3测定方法精密吸取样品溶液1mL于10mL容量瓶中，加入0.5mL0.5%亚硝酸钠，摇匀，放置6min;加0.5mL10%硝酸铝，摇匀，放置6min;加2mL4%氢氧化钠，甲醇定容至10mL，摇匀，放置15min。以甲醇为参比，在510nm处用紫外可见分光光度计进行测定。3.2测定波长的选择精密吸取“3.1.1”项下对照品溶液，按“3.1.3项下溶液处理方法，以甲醇为参比，用紫外分光光度计，1cm比色皿在350～600nm波长范围内扫描，测定吸收度。在510nm处有最大吸收，故选择510nm为测定波长。3.3线性

5、关系考察准确量取“3.1.1”项下芦丁对照品0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2mL，按“3.1.3”项下方法操作，于510nm处测定。以吸收度A对浓度C绘制标准曲线。得到芦丁的回归方程为:A=2.674C-0.016r=0.9997芦丁的线性范围为4.32×10-3～2.59×10-2mg·mL-1。3.4精密度试验按“3.1.2”项下制备供试品溶液，按“3.1.3”项下方法测定5次，结果RSD为0.86%。3.5稳定性试验对同一供试品溶液，在3h内每隔20min按“3.1.3”项下方法测定1次，吸收度基本不变，RSD为0.82%（n=9），表明供试品溶液在3h内稳定。3

6、.6重复性试验取同一批苦荞籽壳共5份，每份5g，按“1.3”项下方法得到苦荞黄酮提取物后，按“3.1.2”项下方法配成供试品溶液，按“3.1.3”项下方法分别进行5次独立测定，记录吸收度。结果表明提取物中的总黄酮含量差异小，重复性好，RSD为0.86%（n=5）。3.7加样回收率试验取已测含量苦荞籽壳样品3份，每份5g，按“1.3”项下方法操作，取其粉末5mg，分别准确加入芦丁对照品2.48mg，按“3.1.2”项下方法制备所需溶液，按“3.1.3”方法于510nm波长处测定吸收度。平均回收率为99.7%，RSD为0.21%。3.8样品含量测定分别精密称取3份苦荞籽壳样品，按“1.3

7、”项下方法提取，并按“3.1.2”项下方法制备样品溶液，“3.1.3”项下方法于510nm处测定，总黄酮的平均得率为39.5mg·g-1，RSD为0.24%。4讨论通过薄层层析的分析，可知提取物中主要含有芦丁和槲皮素两种黄酮类化合物。根据文献报道，有关总黄酮测定的方法有Davis法、薄层扫描法、PR-HPLC法、重量法、荧光法、分光光度法、极谱法、毛细管电泳法等。目前对于总黄酮含量测定尚无统一的标准方法，本研究采用比较常用的分光光度法，其机理是黄酮类化合物