土贝母皂苷体外抗乙型肝炎病毒的药效研究论文

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1、土贝母皂苷体外抗乙型肝炎病毒的药效研究论文周艳萌，吴中明，向晓波【关键词】土贝母皂苷；,,2．2．15细胞；,,乙型肝炎病毒；,,体外摘要：目的观察土贝母皂苷体外抗乙型肝炎病毒(HBV)效果。方法以2．2．15细胞为靶细胞，给药后通过检测细胞表面及培养液中HBsAg，HBeAg和HBVDNA，观察土贝母皂苷抗HBV效果。结果土贝母皂苷各浓度组对HBsAg，HBeAg表达均有抑制作用，但以0.1mg/ml作用48h时最强.freelg/ml组显著（P0.05）。结论土贝母皂苷在体外有抗乙型肝炎病毒(HBV)作用。关键词：土贝母

2、皂苷；2．2．15细胞；乙型肝炎病毒；体外Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofantiHBVactivityinvitro．MethodsTheantiHBVactivityofTubeimosideanhepatocellularcarcinomacellsstablytransfectedosidecouldsignificantlyreduceHBsAg、HBeAglevel.After48hoursofcontinuousexposuretoTubeimosideattheconc

3、entrationof0.1mg/mlinvitroculture,theinhibitionsofHBsAg，HBeAgg/mlinvitroculture.ConclusionTheantiHBVeffectofTubeimosideisdemonstratedin2．2．15cells．Keyoside；2．2．15cells；HBV；Invitro乙型肝炎是由嗜肝DNA病毒（HepatitisBvirus,HBV）引起的一种世界范围内的传染性疾病。目前全世界约有3亿多人为慢性HBV感染，我国约占半数。受HBV慢性感染

4、的人群罹患肝硬化和原发性肝细胞癌（Hepatocellularcarcinoma,HCC）的相对危险性至少增加100倍，并最终导致死亡，给人们的健康造成极大的威胁和损害。因此，寻求高效低毒的抗HBV的天然药物已成为刻不容缓的问题［1，2］。土贝母含有多种化学成分，具有抗肿瘤、抗病毒、免疫抑制等多种药理作用［3］。陈英俊等［4］曾用土贝母加入九三三肝泰丸中治疗乙型肝炎208例，总有效率为93.4%，说明土贝母在治疗乙肝的复方中起到了一定的作用，但土贝母是否具有抗HBV的作用国内外尚未见报道。为了观察土贝母皂苷对乙型肝炎病毒是否

5、有影响，我们用HBV基因转染的人肝癌细胞系（HepG2）的2.2.15细胞体外培养作工具，检测土贝母皂苷在体外对乙型肝炎病毒的作用。现将实验结果报告如下。1.材料与方法1.1材料2.2.15细胞系HBV（adl，转接种于6孔、96孔培养板及25ml培养瓶中。培养4d后换含不同浓度（10，5，1，0.1，0.01mg/ml）的土贝母皂苷培养液，分别作用24，48，72h。每24h换液1次，共培养72h，换出的上清及收集的细胞置20℃保存备测。以相同条件不含药物培养液和阳性对照药物(拉米夫定)培养液培养的细胞作为对照。空白孔不加

6、细胞，只加培养液。1.2.2药物对细胞的毒性实验用MTT比色分析法［6］检测细胞吸光度值，与相应对照孔的吸光度值（存活细胞100）比较，按公式计算存活细胞的百分比，对细胞毒性进行动态观察。细胞存活率=（实验孔OD值/对照孔OD值）×100。1.2.3药物对2.2.15细胞HBsAg，HBeAg和HBcAg的影响细胞爬片：用间接免疫荧光法［7］进行染色，于荧光显微镜下观察，以胞膜或核膜呈黄绿色荧光者为阳性。流式细胞仪（FACSCalibur）检测：上机前细胞悬液用PBS液200ml重悬，FITC受激发后发出黄绿色荧光，设定氩离

7、子激发光源为488nm，用CellQuest软件采集细胞20000个再进行数据分析，以单参数直方图表示。1.2.4药物作用后细胞培养上清中HBsAg，HBeAg和HBVDNA的检测HBsAg、HBeAg的检测：用酶联免疫吸附试验（ELISA法）分别检测每孔HBsAg，HBeAg的P/N值，操作按试剂盒说明书进行，根据公式计算抑制率：某药对HBsAg或HBeAg的抑制率=［（对照组平均P/N药物处理组平均P/N）/对照组平均P/N］×100［8］上清中HBVDNA的检测：实时荧光定量PCR法操作按试剂盒说明书进行，结果以Ct值

8、表示。1.3统计学处理采用SPSS10.0软件，配对t检验。2结果2.1药物的细胞毒性实验在加入不同浓度的土贝母皂苷和3TC作用24，48h及72h后，用显微镜观察细胞病变，72h内土贝母皂苷1，0.1mg/ml及0.01mg/ml和3TC各组细胞形态与对照组无明显差别；土贝母皂苷10mg