黑芝麻提取物促b16黑素瘤细胞黑素合成及其机制的研究论文

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1、黑芝麻提取物促B16黑素瘤细胞黑素合成及其机制的研究论文姜泽群，徐继敏，吴琼，何光源【摘要】目的研究黑芝麻的水提取物对B16黑素瘤细胞系酪氨酸酶活性、黑素合成及相关基因和蛋白表达的影响，探讨黑芝麻促进黑色素合成的可能机制。方法选择3种浓度(0.5,1,2mg/ml)的黑芝麻水提物作用于B16黑素瘤细胞72h，观察其对黑素细胞的增殖、酪氨酸酶活性和黑素含量的影响。免疫印迹法和半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分别检测药物作用48h前后酪氨酸酶(Tyrosinase)、小眼相关转录因子(microphthalmiaassociatedtr

2、anscriptionfactor，MITF)，酪氨酸酶相关蛋白酶1(TRPl)和酪氨酸酶相关蛋白酶2(TRP2)蛋白和mRNA表达水平的变化。结果3种浓度的黑芝麻水提物可轻微促进B16细胞的增殖(P0.05);试验浓度范围内可明显促进B16细胞黑素合成和酪氨酸酶活性增加(P0.05).freelRNA表达(P0.05)，但对TRP-1、TRP-2的表达几乎没有影响(P0.05)。结论黑芝麻水提物在体外能直接刺激B16黑素瘤细胞黑色素的合成，上述变化可能通过促进酪氨酸酶和MITF的基因转录和蛋白表达作用来完成。【关键词】黑芝麻水提物;酪氨酸酶

3、(Tyrosinase);黑素;小眼相关转录因子(MITF);酪氨酸酶相关蛋白酶1(TRPl);酪氨酸酶相关蛋白酶2(TRP2)Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofSemenSesamiNigrum(ethodsThreedifferentconcentrationsofITFanner(P0.05).AlmostnoeffectulatemelanogenesisinB16melanomacells,aybeinducedbyincreasingexpressionofTYRandMITFonmRNAan

4、dproteinlevels.KeySemenSesamiNigrum;Tyrosinase;Melanin;Microphthalmiaassociatedtranscriptionfactor(MITF);Tyrosinase-relatedprotein-1(TRPl);Tyrosinase-relatedprotein-2(TRP2)黑芝麻是我国传统的滋补食品，有显著的医疗保健功效。早在几千年前的《本草纲目》中对黑芝麻的功效就有描述：补肝、益胃、精血、润肠、生津、明目、乌发、降压。近年来有研究表明黑芝麻对酪氨酸酶的激活及促黑色素生成方

5、面均具有较强的作用1,2，但其分子机理尚不清楚。本实验通过检测黑芝麻水提物对细胞的增殖活性、黑素含量及酪氨酸酶活性的影响，并进行黑素合成的相关基因(Tyrosinase/MITF/TRP-1/TRP-2)mRNA和蛋白质表达的测定，从细胞和分子水平上探讨黑芝麻促进黑色素生成的作用机制及对白发治疗的可能性。1材料1.1试剂左旋多巴(L-DOPA)，DMSO，DMEM高糖培养基(美国Gibco公司)，胎牛血清(杭州四季青公司)，Trizol(InvitrogenLifeTechnologies)，PCR试剂盒和RT-PCR试剂盒PCR引物购自北京

6、奥科生物技术公司(均购自宝生物大连公司)，多克隆兔抗人酪氨酸酶(Tyrosinase)抗体、多克隆兔抗人MITF抗体、多克隆兔抗人酪氨酸酶相关蛋白酶1(TRPl)抗体、多克隆兔抗人酪氨酸酶相关蛋白酶2(TRP2)抗体和兔抗人肌动蛋白多克隆抗体，辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔抗体购自美国SantaCruz公司，其他为国产分析纯试剂。1.2药物的提取实验用黑芝麻由武汉中医协会陈昌一医生鉴定，提取方法采用索氏提取法，水提后真空冷冻干燥，用DMSO配成所需浓度的黑芝麻水提物溶液。1.3细胞培养B16黑素瘤细胞株购自武汉大学典型培养物保藏中心。用含10%

7、胎牛血清的DMEM培养基37℃,5%CO2条件下常规培养,待细胞生长至近融合状态，0.25%胰蛋白酶消化，以每瓶约105个细胞传代，每3天传代1次。2方法2.1细胞增殖的测定甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)3将配制的细胞悬液调整细胞浓度为2×104/ml加入96孔培养板，每孔100μl，再分别加入不同浓度药物(终浓度为(0.5,1,2mg/ml)，每一浓度设立3个复孔，取平均值，并设置培养基为对照组。药物作用3d后，每孔加入5g/L的MTT溶液20μl，37°C孵育4h。弃去上清液,每孔加二甲基亚砜100μl，选择490nm波长在酶联免疫检测仪上

8、测各孔吸光度值，以空白孔调零。细胞活力增殖率(%)=(各浓度平均吸光度值÷对照组平均吸光度值)×100%。每一处理因素重复测定3次。2.2酪氨酸酶活性测定4将配制的