b16黑素瘤细胞黑色素含量测定方法

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1、黑色素含量测定一．实验材料仪器：倒置显微镜、96孔板、微量移液器（枪及枪头）、恒温培养箱、喷壶、脱脂棉、封口膜、培养瓶100ml、点滴瓶(250ml、500ml)、烧杯（500ml、50ml）、量筒（500ml，100ml，10ml），滤器及滤膜（0.22um）、酒精灯、移液管、吸球、吸管架及瓶架、镊子、标签贴、双蒸器、超净台试剂：胎牛血清、DMEM培养基、胰蛋白酶、PBS液、75%酒精、NaOH、二．实验方法用NaOH溶解法。取对数期的B16黑素瘤细胞，弃去培养液，用PBS液清洗2次，加入培养液，调节细胞浓度为0.5×104—1×104/孔相当于干细胞悬液5×104—10×

2、104个（ml-1）,加入96孔板中，每孔加入100ul。过夜后(12h)，细胞贴壁,使用同MTT法同浓度同体积的含药培养基加入，并设置对照组（细胞+培养基）和空白对照组（培养基），每个浓度组设置5个复孔，培养基中均含5%胎牛血清，于37摄氏度5%CO2恒温培养箱中培养56h后，吸去培养液用0.25%胰酶消化，以1000r/min离心5min弃上清液，每个处理因素下的细胞加入200ul含10%二甲基亚砜（DMSO）的NaOH（1mol/L）溶液，于65摄氏度水浴完全溶解黑色素颗粒，酶联免疫检测仪检侧490nm处吸光度A值。（黑素形成率＝A实验组/A空白组平均值×100%）