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1、丹参对小鼠黑色素瘤细胞株B16.freeligrationandmetastasisofB16-BL6metastaticmousemelanomacellsanddiscussitsfunctionalmechanism.MethodsTheproliferation,adhesion,invasionandmigrationcapacityofB16-BL6metastaticcellsentmembraneinvasionandmigrationassayinvitrorespectively.Mousespontaneousmelanomamodele
2、tastasisinvivo.ResultsTheextractofRSMbidirectionallyadjustedthemultiplicationofB16-BL6cells,promotedprominentlytheadhesionofB16-BL6toLaminin,inhibitedsignificantlyB16-BL6invadingreconstitutedbasementmembraneandthemigrationofB16-BL6.Inthemousespontaneousmelanomamodel,itsuppressedsign
3、ificantlythevolumeoflungmetastaticnodesbuthadlittleeffectonthenumberoflungmetastaticnodes.ConclusionTheextractofRSMcanalleviatethedegreeofthemetastasisofB16-BL6metastaticmousemelanomacells,ayberelatedatrixandreducingthemigrationofB16-BL6cells.Keyousemelanoma侵袭与转移是恶性肿瘤最显著的生物学特征,是导致癌症
4、患者临床死亡的主要原因。因此,阻止肿瘤细胞的侵袭和转移是恶性肿瘤治疗成败的关键因素。丹参为唇形科植物丹参(SalviamiltiorrhizaBge.)的干燥根及根茎,其味苦、微寒,入心、心包及肝经,具有活血通络、祛瘀止痛、凉血消痈等功效,可用于月经不调、经闭痛经、癥瘕积聚、胸腹刺痛、热痹疼痛、疮疡肿痛、心烦不眠、肝脾肿大、心绞痛等1。小鼠黑色素瘤细胞B16-BL6具有高转移特性,是研究肿瘤侵袭转移的理想模型。本实验从体内、体外实验全方位研究丹参对B16-BL6细胞侵袭、粘附、运动和转移能力的影响,希望有助于其临床的进一步应用。1实验材料1.1药物及试剂中药的
5、制备：将原药材浸泡于药量10倍的水中1h,然后文火煎煮2h,滤出上清后再加8倍量水煎煮1h,合并2次上清液,静置,3000r/min离心15min。上清在水浴上浓缩为1g/mL的贮存液,置4℃保存。实验前,用DMEM培养液(不含血清)稀释成所需浓度,过滤灭菌,用于体外实验；或者用蒸馏水直接稀释为所需浓度进行体内实验。DMEM液为Gibco公司产品；新生牛血清(FCS)为杭州四季青产品；牛血清白蛋白(BSA)、噻唑蓝(MTT)为AMRESCO公司产品；纤维粘连蛋白(FN)、Matrigel由北京大学医学部细胞研究室提供；层粘连蛋白(LN)为Sigma公司产品；优
6、凯特胶(Eukitt)为Fluka公司产品；Trans、直径13mm)为EM培养液中。1.3动物C57BL/6小鼠,雄性,6～8周龄,体重(20±2)g,上海斯莱克实验动物有限公司提供SCXK(沪)2003-0003。2实验方法2.1B16-BL6细胞的增殖抑制实验参照carmichael的MTT法2,取对数生长期的细胞,0.25%胰蛋白酶消化,离心收集细胞,用培养基稀释成5×104/mL,加入96孔板中,每孔100μL,每个样品点6个复孔。培养24h后,换液,每孔加入含药培养液100μL(丹参终浓度为6.67、3.33、1.67、0.83、0.42mg/mL
7、,临用时用培养液将贮存液稀释配置),对照孔直接加入100μL培养液。37℃培养48h后,每孔加入20μLMTT(2mg/mL),再培养4h,弃上清液,各孔加入100μLDMSO溶解结晶,于酶标仪(SPECTRAMAX190)上测量570nm波长处OD值,实验重复2次。按下式计算药物对细胞生长的抑制率(IR)。IR(%)=(1－实验组平均OD值/对照组平均OD值)×100%2.2B16-BL6细胞粘附实验3将LN2μg铺于96孔板中,室温过夜干燥后,用2%BSA的磷酸盐缓冲液(PBS)20μL,37℃封闭1h后,用PBS洗3次,每孔加入8×104个预先经药物作用
8、48h的B16-BL6细胞,37℃和5
