balb-c小鼠黑色素瘤b16移植肿瘤模型的建立

《balb-c小鼠黑色素瘤b16移植肿瘤模型的建立》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、BALB/c小鼠黑色素瘤B16移植肿瘤模型的建立【关键词】黑色素瘤模型动物小鼠ABSTRACT:OBJECTIVEToestablishneoplasmtransplantationmodelsofmelanomainBALB/cmiceMETHODSB16melanomacellsinlogarithmicgroice'sbackhypodermisandfeettransplantationofmelanoma.Thegroelanomainmiceorpropertiesmunohistochemistry.Therelationsbetbero

2、fB16cellsinoculatedandtumorigeicrate,andtheinfluenceoftumorigenesisformiceice'sbackskin,feetorankle,andthentheydevelopedtotubercles,ulceration,hemorrhageanddeath.ThetumorigeicrateininoculatingorigeicratehasapositiverelationtothenumberofinoculatedB16cells,andishighinBALB/cmiceino

3、culatedtheB16cellsintobackhypodermis.Keyelanoma;models,animal;mice恶性黑色素瘤是于黑色素细胞的恶性肿瘤，是起源于神经嵴的黑色素细胞恶性肿瘤［1］，近年来发病率呈逐年上升的趋势，目前尚无有效的治疗方法［2，3］.本实验通过给接种不同数量的黑色素瘤细胞，建立了便于早期观察的黑色素瘤动物模型，并筛选出最佳接种细胞数及接种部位，为进一步进行黑色素瘤的治疗实验研究奠定基础.1材料与方法1.1材料实验动物取清洁级近交系BALB/c小鼠，购于中国军事医科大学实验动物中心，雄性，6，7周龄，体重为17～

4、19g.仪器：二氧化碳细胞培养箱（MCO17AC）为日本SANYO公司产品.试剂：S100抗体及SP试剂盒分别为美国SantaCruz公司及ZYMED公司产品.1.2方法1.2.1细胞培养B16黑色素瘤细胞株购于上海细胞生物研究所，常规培养于RPMI1640100mL/L胎牛血清加双抗（青霉素100U/mL，链霉素100mg/L）的培养液内，置于37℃，50mL/L二氧化碳培养箱中培养.稳定传代3，4代后，取对数生长期细胞，经2.5g/L胰酶消化后用无血清培养液重悬收集细胞，用无菌生理盐水调整细胞密度备用.用台盼蓝染细胞确定活细胞数在95%以上

5、.1.2.2小鼠背部皮下肿瘤模型的建立取BALB/c小鼠24只，随机分为3个组，每组各为8只，用750mL/L质量浓度的乙醇消毒小鼠背部皮肤，取B16黑色素瘤细胞溶液接种于小鼠背部皮下，第1，2，3组的接种细胞数分别为1×1010/L，5×109/L，1×109/L，接种剂量为0.1mL.每日观察并记录肿瘤生长情况.1.2.3小鼠足垫肿瘤模型的建立取BALB/c小鼠24只，随机分为3个组，每组各为8只，用750mL/L质量浓度的乙醇消毒小鼠足垫部皮肤，取B16黑色素瘤细胞溶液接种于小鼠足垫皮下，3个组接种细胞数分别为1×1010/L，5×109/L，1

6、×109/L，接种剂量为50μL.每日观察并记录肿瘤生长情况.1.2.4观察指标观察肿瘤出现时间与肿瘤生长速度，接种后每日观察小鼠背部及足垫部皮肤，将出现黑色斑点的时间记为肿瘤出现时间，同时记录肿瘤外观形态、颜色、小鼠体重及生活习性的改变等情况.1.2.5病理学检查按照常规将肿瘤组织制成石蜡切片，行苏木精伊红染色，在光学显微镜下进行观察；免疫组织化学观察采用SP法.2结果2.1小鼠背部皮下肿瘤模型接种B16黑色素瘤细胞株后小鼠体重均呈上升趋势，生活习性未见改变.接种5d后，第1，2组小鼠均相继出现蓝黑色斑点或斑片，其中第1组小鼠肿瘤在接种后第11～

7、15日时处于快速生长期，之后变为相对缓慢，第16日后其中2只小鼠的肿瘤开始缩小，直至触摸不清，仅能观察到皮肤表面蓝黑色斑片，1只小鼠在病情发展中出现双目不睁症状，另有2只小鼠随结节状肿瘤增大，出现肿瘤破溃、出血、结痂、死亡；第2组小鼠在接种后第7～18日时肿瘤生长迅速，于第19日处死1只小鼠进行病理检查；第3组小鼠中在接种后第11日时6只相继出现蓝黑色斑点或斑片，肿瘤生长一直缓慢，第15日时1只小鼠的肿瘤开始缩小，触摸不清，直至消失，1只小鼠肿瘤出现转移，体重下降，活动减少，呆滞，死亡（图1）.背部皮下肿瘤的特点为表皮出现蓝黑色的斑点或斑片，边界清楚，

8、皮毛无明显减少；隆起的肿物由硬至软直至触摸不清或由硬至软再至硬直至肿瘤破溃、出血及结痂形成.第