探讨过敏性哮喘中eotaxin致气道炎症的机制

《探讨过敏性哮喘中eotaxin致气道炎症的机制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、探讨过敏性哮喘中Eotaxin致气道炎症的机制摘要:目的探讨过敏性哮喘中嗜酸粒细胞趋化因子Eo-taxin致气道炎症的机制.方法将豚鼠40只随机分为哮喘组和对照组，卵蛋白致敏及诱发过敏性哮喘.①收集支气管肺泡灌洗液（BALF），观察细胞总数（TC）及嗜酸粒细胞（Eos）、巨噬细胞（AM）、淋巴细胞（L）、中性粒细胞（N）比例变化;②豚鼠肺组织病理标本经HE染色，观察病理学改变;③采用原位分子杂交技术观察肺组织中EotaxinmRNA的表达;④采用Northernblot方法观察肺组织中EotaxinmRNA表达情况.结果过敏性哮喘豚鼠BALF中TC，Eos比例较

2、对照组明显升高（P<0.01），AM比例显著下降（P<0.01），L和N比例与对照组相差不明显（P>0.05）.哮喘豚鼠肺组织中可见气道炎症反应及Eos和L粘膜下浸润.支气管粘膜、粘膜下层及周围肺组织中EotaxinmRNA阳性细胞表达率（198±46）mm-2较对照组（16±8）mm-2明显增加（P<0.01）.Nortthernblot杂交可见哮喘组表达EotaxinmRNA较对照组明显升高.结论过敏性哮喘中Eotaxin基因表达明显增强，同时伴有Eos肺内募集及激活，进而导致气道炎症而诱发哮喘.　　Keya;eosinophil;e

3、otaxin　　Abstract:AIMTostudytheroleofeotaxinintheairmationofasthma.METHODS①Ovalbumin（Ova）sensitizedandchallengedguineapigs;②Bronchialalveolarlavagefluid（BALF）ofguineapigsplesoflungtissueRNAinlungtissueofguineapigsinedbyinsituhybridization（ISH）andNorthernblot.RESULTSInairmation，theinfi

4、ltrationofeosinophilsinantpathologicchangeofasthma;ThecountsofeosinophilsenhancedmoreprominentlyinBALFofasthmaticguineapigsthaninthatofthenormalcontrolgroup（P<0.01）.paredalsubjects，theepithe-liumofbronchialmucosaandalveolusRNAaticguineapigs（198±46）cells・mm-2thaninthoseofthe

5、normalguineapigs（16±8）cells・mm-2（P<0.01）byISHandthesameresultalsocanbefoundbyNorthernblot.CONCLUSIONBronchialasthmaisadiseasemationandinfiltratrationofeosinophils.Eotaxingeneisexpressedathighlevelsinasth-maticlungtissues，ulateandacti-vateeosinophils.OPS（3-［n-吗啉］-丙磺酸），9μL甲醛，

6、25μL去离子甲酰胺，4μL上样缓冲液（含2.5g・L-1溴酚蓝，400g・L-1蔗糖），65℃孵育、冷却后离心.将凝胶放入1×MOPS缓冲液的电泳槽中预电泳5min，顺序加样.3～4V・cm-1电泳至溴酚蓝染料迁移至凝胶下游3/4处，紫外灯下观察.真核细胞28s和18sRNA比值为2∶1，表明RNA无降解.　　1.7Northern杂交末端地高辛标记的Eotaxin寡核苷酸探针、β-actin探针在HighSDS缓冲液中稀释为1～10nmol・L-1.印迹法将RNA转移至尼龙膜上，紫外交联，固定RNA.将

7、尼龙膜放入杂交袋中，42℃预杂交1h，加入地高辛标记探针的杂交液，杂交后室温下充分洗膜.NBT/BCIP比色法显色检测.杂交后对各条带进行密度灰度扫描，对比其RNA表达量的差异.　　统计学处理:数据采用SPSS8.0统计学软件行t检验，P<0.05为显著性差异.　　2结果　　2.1过敏性哮喘豚鼠气道炎症变化以卵蛋白诱发豚鼠哮喘连续5d，哮喘组豚鼠肺组织气道粘膜水肿明显，表现为气道粘膜上皮细胞肿胀、细胞核被推至细胞边缘，部分气道上皮组织完全变性、坏死、脱落、支气管腔狭窄，甚至完全闭塞、粘液栓形成等.支气管周围血管扩张、充血，粘膜及粘膜下层可见有大量炎性细胞浸

8、润，以Eso、单核细胞及