经纹状体注射胶质细胞系源性神经营养因子对帕金森病模型小鼠黑质多巴胺能神经元保护作用的实验研究论文

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1、经纹状体注射胶质细胞系源性神经营养因子对帕金森病模型小鼠黑质多巴胺能神经元保护作用的实验研究论文经纹状体注射胶质细胞系源性神经营养因子对帕金森病模型小鼠黑质多巴胺能神经元保护作用的实验研究时间:2016-07-1011:32:28阅读:次作者:freelethyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyridine，MPTP）制备成年小鼠PD模型，通过单侧纹状体定位注射GDNF，取中脑黑质节段，做连续冠状石蜡切片，结合免疫组织化学染色方法，观察各组酪氨酸羟化酶（tyrosinehydroxylase，TH）、钙结合蛋白（calbin

2、dinD28k，CB）的表达，光镜观察并细胞计数，统计学分析。结果在模型制备的第4、6天，单侧纹状体定位注射GDNF后，小鼠黑质致密部TH与CB阳性神经元数量显著多于注射PBS组。结论经纹状体注射GDNF对成年PD小鼠黑质多巴胺能神经元具有保护作用，且这种保护作用可能与细胞内CB表达增加有关。关键词:胶质细胞系源性神经营养因子;多巴胺能神经元;1-甲基4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶Abstract:ObjectiveToinvestigatetheprotectiveeffectofintrastriatalGDNFondopaminergic（D

3、A）neuronsinthesub-stantianigraofMPTP-inducedmousemodelofParkinsondisease（PD）.MethodsThePDmodelicefourorsixdaysafteranintraperitonealinjectionofMPTP30mg.kg.Themodelmice.Afteraseven-daysurvivalperiod，themodelmiceentofsubstantialnigra（SN）fixed，embeddedandcoronallysectionedcontinuou

4、sly.Themicrosectionsmunohistochemistryusinganti-THandanti-CBantibodiestolabelDAneuronsandCB-containingneuronsrespectively，icroscopeandanalyzedstatistically.ResultsSevendaysafterthesteriotaxicintrastriatalinjectionofGDNF，thenumbersofTHandCBpositiveneuronsodelmousecontrolgroup.Con

5、clusionIntrastriatalGDNFcanprotectDAneuronsinPDmodelmice，andthisrolemayberelatedtotheincreaseofCBexpression.Keyinergicneurons;1-methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tet-rahydropyridine帕金森病（PD）是一种中枢神经系统退行性疾病，主要病理变化是中脑黑质多巴胺能神经元进行性变性死亡，导致其靶区尾状核与壳核内的多巴胺含量降低［1-2］。胶质细胞系源性神经营养因子（GD-NF）是多巴胺（DA）能神经元的

6、神经营养因子之一，自从1993年由Lin等人从大鼠B49胶质细胞系中分离纯化后，大量的实验证实其对腹侧中脑DA能神经元有特异性的促存活和促形态学分化作用［3～7］。由于GDNF是神经肽类大分子物质，不能通过血脑屏障，所以在应用GDNF治疗PD的过程中，主要问题在于如何让其越过血脑屏障而进入中枢神经系统。我们实验室已证明了向PD模型大鼠的黑质部位注射GDNF，能明显改善PD症状，促进DA能神经元的存活。但是黑质位置较深、范围局限，直接向黑质注射GDNF，损伤相对较大、难度相对较高。于是设想如果向DA能神经元的靶区纹状体注射GDNF，是否会通过逆行运输而保

7、护黑质致密部的DA神经元呢?我们通过利用1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶（MPTP）构建的PD模型小鼠，经纹状体注射外源性GDNF，观察黑质致密部TH和CB阳性神经元的数量变化情况，评价经此途径给予GDNF对黑质DA能神经元的保护作用。1材料和方法1.1材料1.1.1试剂和主要仪器胶质细胞系源性神经营养因子（glialcellline-derivedneurotrophicfactor，GD-NF），MPTP，小鼠抗大鼠酪氨酸羟化酶（tyrosinehydroxylase，TH）抗体（一抗），Sigma公司;生物素结合的羊抗小鼠单克隆抗体（

8、二抗），Sigma公司;封闭用羊血清原液，北京中杉生物工程有限公司;辣根过氧化物酶标记的生物素