叶酸介导靶向砒霜纳米粒的实验研究论文

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1、叶酸介导靶向砒霜纳米粒的实验研究论文【摘要】目的研究叶酸偶联牛血清白蛋白的合成工艺，制备包裹砒霜的白蛋白纳米粒并检验其对靶细胞的杀伤作用。方法叶酸在缩合剂的作用下与牛血清白蛋白偶联，通过正交设计选择最佳配方；用去溶剂法制备包裹砒霜的纳米粒，并观察其对靶细胞特异性杀伤作用。结果采用最佳条件合成的叶酸偶联牛血清白蛋白的偶联率为30.31μg/mg，纳米粒的砒霜包封率为10.3%，对靶细胞杀伤率为97%，对非靶细胞的杀伤力仅为23%。结论包裹有砒霜的叶酸偶联牛血清白蛋白纳米粒（简称F-BSANP）对靶细胞有特异性杀伤作用。【关键词】砒霜；纳米粒；叶酸；牛血清白蛋白Abstract：O

2、bjectiveTostudythesyntheticprocedureoffolate-conjugatedbovineserumalbumin(F-BSA)andpreparationofalbuminnanoparticlesentrappingarsenictrioxide，andtoexaminethepeculiartoxicityofnanoparticlesontargetingcells.MethodsFolicacidalbuminviacondensingagent.freelulaofF-BSAbytheorthogonaltestdesign．Then

3、anoparticlesethod，andthepeculiartoxicityofF-BSANPonA549adeinthebestformulag．TheentrappingrateofarsenictrioxideinedthepeculiartoxicityofF-BSANPontargetingcellsandcontrolgroupcells，respectively，andthedeathrateoftargetingcellsalbumin肿瘤是严重危害人类生命和健康的常见病和多发病，是导致残疾和早死的主要疾病之一。目前，临床使用的抗肿瘤化疗药物均有较大的毒副作

4、用，有些严重的毒副反应是限制药物剂量或使用的直接原因。研究发现，在多种肿瘤细胞(如卵巢癌、肺癌、乳腺癌、结直肠癌等)膜表面上的叶酸受体活性和数量显著高于一般正常细胞，这为叶酸受体介导药物靶向于肿瘤细胞的研究奠定了基础［1］。中药砒霜（三氧化二砷）是中药中的传统毒药，近年来有关其抗肿瘤作用，尤其是在我国率先开展的三氧化二砷治疗急性早幼粒细胞性白血病(APL)的研究引起了人们的广泛兴趣；研究已发现砒霜能显著抑制人肺癌的细胞生长并诱导其凋亡［2］。但是,在治疗过程中的严重毒副作用是影响其抗癌疗效的主要原因。本实验以传统中药砒霜为治疗药物，将其包裹在用叶酸偶联白蛋白制成的纳米粒中，并进

5、行其对靶细胞杀伤作用的研究。为以后制备其它抗癌药靶向制剂作铺垫。1材料人肺癌细胞株A549（购于武汉大学生命科学院中国典型培养物保藏中心）；人骨髓间充质干细胞；分离自正常人骨髓血（骨髓血样由南昌大学医学院一附院血液科提供）；牛血清白蛋白（上海新量化工试剂有限公司）；叶酸（上海新量化工试剂有限公司）；1-乙基-3-（3-二甲氨丙基）碳二亚胺盐酸盐（简称EDC·HCl）（上海三杰生物技术有限公司）；SephadexG-25（Pharmacia）；三氧化二砷（购自上海化学试剂采购供应站，CP）；胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）；RPMI1640培养基（Gibco）；胰蛋白酶

6、1∶250（Amresco）。2方法和结果2.1叶酸偶联白蛋白的合成2.1.1叶酸偶联白蛋白的合成与分离将叶酸溶于pH7.4的磷酸缓冲液(PBS)中，加入EDC·HCl后搅拌活化5min，再加入50mg/ml牛血清白蛋白的PBS溶液，搅拌下反应数小时即得［3］。将反应液过SephadexG-25柱，收集前段淡黄色有乳光部分［4］。2.1.2因素和水平的确定经过查阅相关文献资料和大量的预实验最终确定叶酸用量、EDC·HCl与叶酸摩尔比、反应时间3因素各取3水平优化工艺。见表1。表1因素水平（略）2.1.3评价指标的选取与测定叶酸与牛血清白蛋白偶联越多，纳米粒对肿瘤的靶向性就越高。

7、因此选择叶酸与牛血清白蛋白偶联率作为评价指标。偶联率的测定，将叶酸偶联白蛋白溶于pH7.4的PBS中，用2.5%的胰蛋白酶消化2h后离心取上清液于358nm处测紫外吸收。标准曲线法定量，计算偶联率。偶联率=被偶联的叶酸量/μg被偶联的牛血清白蛋白量/mg2.1.4正交实验结果按正交设计表L9(34)进行实验，计算偶联率（见表2），方差分析结果见表3。表2正交设计（略）表3方差分析表（略）X1，X2和X3分别是各因素水平1、水平2、水平3偶联率之和；△X是各因素内部水平1、水平2、水平3偶联率