棕榈酸抑制胰岛min6 β细胞生长的分子机制

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1、棕榈酸抑制胰岛MIN6β细胞生长的分子机制：崔巍,黄葶,刘均利,施秉银【摘要】　　目的:观察饱和脂肪酸棕榈酸（Palmitate,PA）对小鼠MIN6β细胞生长的影响,从细胞周期角度来探讨其发生的分子机制。方法:采用5g/LBSA代替血清培养36h使MIN6细胞同步化处于G0期。然后用PA（0.25～1.0mmol/L,45min～24h）干预,采用MTT法检测细胞活力,流式细胞术测定细胞周期,采用IN6细胞增殖（P＜0.01);（2）PA亦能明显抑制细胞周期进程,使MIN6细胞周期更多滞留在G0

2、/G1期(P<0.01),G2/M期与S期细胞比例降低(P<0.01);（3）PA能显著的抑制细胞周期相关蛋白CDK4、CyclinD1的表达（P＜0.05）,并与细胞周期延迟一致。结论:PA抑制MIN6β细胞生长可能是通过降低MIN6β细胞的细胞周期相关蛋白cyclinD1/CDK4的表达,导致从G1S期的阻滞,从而减弱细胞增殖。【关键词】胰岛β细胞;棕榈酸;细胞周期;增殖　　［Abstract］AIM:Toinvestigatetheeffectofsaturatedfatt

3、yacidPalmitate(PA)oncellviabilityofMIN6βcellandthepossiblecellcyclepathdeprivationfor36h,andfurtherMIN6cellsmol/L,45min-24h）paredetricassay.ThecellcycleeasuredbyFACSanalysis,andcellcycleproteinsentcausedsignificantreductionsincyclinD1andCDK4levels,it

4、ate;cellcycle;proliferation　　在肥胖个体和2型糖尿病（type2diabetesmellitus,T2DM）患者中常有饱和游离脂肪酸（freefattyacids,FFA）的升高,研究发现,饱和FFA的升高可能与胰岛β细胞凋亡和功能障碍及胰岛素抵抗密切相关。本实验以小鼠MIN6胰岛β细胞瘤株（以下简称MIN6细胞）为实验对象,观察不同浓度饱和脂肪酸（棕榈酸,Palmitate,PA）对体外培养下的MIN6细胞的生长的影响,进而从细胞周期角度来探讨其发生的分子机制。　　1

5、材料和方法　　1．1材料　　MIN6β细胞株(16－30代)由加拿大McGill大学刘均利教授提供。DMEM培养基、胎牛血清(Gibico)、AntibioticAntimycotic(100X)购自Invitrogen公司。ECL高级EM培养液以1∶5和1∶10的比例稀释成1.0mmol/LPA/1g/LBSA和0.5mmol/LPA/5g/LBSA的终浓度;用无血清的含葡萄糖25mmol/L的DMEM培养液以1∶10和1∶20的比例稀释成0.5mmol/LPA/5g/LBSA和0.25mmo

6、l/LPA/2.5g/LBSA的终浓度［1］。　　1．2．2细胞培养　　MIN6细胞用含100mL/L胎牛血清的DMEM培养液（25mmol/L葡萄糖,10mmol/L的丙酮酸钠,10mmol/L的HEPES,2mmol/L的L谷氨酰胺,及55μmol/L的β巯基乙醇,10mL/LAntibioticAntimycotic）在37℃50mL/LCO2的细胞孵箱中培养,待到MIN6细胞(1820代)80%左右贴壁,弃去原有培养液,用无血清的含5g/LBSA和0.5mmol/L葡萄糖的DMEM培

7、养液对细胞进行36h同步化培养。然后用无血清25mmol/L葡萄糖DMEM培养液含不同浓度的PA和BSA进行干预,分组如下:(1)2.5g/LBSA;(2)5g/LBSA;(3)10g/LBSA;(4)0.25mmol/LPA/2.5g/LBSA;(5)0.5mmol/LPA/5g/LBSA;(6)1mmol/LPA/10g/LBSA。　　1．2．3MMT法测定细胞增殖情况　　将MIN6细胞按每孔5×103种于96孔培养板,待细胞80%贴壁,细胞同步化36h,弃去原有培养液,加入含不同浓度PA/B

8、SA的培养液干预。实验组分别是终浓度为0.25、0.5、1mmol/L的PA;同时分别设3组含2.5、5、10g/LBSA的对照组。每组10个复孔,每孔总反应体系为200μL。按照设定的时间6h,16h和24h,在倒置显微镜下观察细胞并记录细胞形态;然后每孔加入MTT10μL,继续培养4h。弃去上清液,每孔加入二甲基亚砜150μL,振荡10min,酶标仪（SpectramaxM2MolecularDevices）测定550nm下各个组实验对象的吸光度。　　1．2．4细胞周期分析