乙肝病毒pres1抗原的临床应用论文

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1、乙肝病毒PreS1抗原的临床应用论文【关键词】乙肝病毒;,DNA;,PreS1抗原;,临床意义ClinicalapplicationvalueofHBVPreS1antigen【Abstract】AIM:ToevaluatetheclinicalsignificanceofdetectingPreS1antigenofhepatitisBvirus(HBV).METHODS:HBsAgpositiveserumspecimens(n=1000)frominpatientsandoutpatientserasechainreaction(FQPCR).RESULTS:Theto

2、talPreS1positiverateoresensitivethanHBeAginationofPreS1hasagreatapplicationvalueindiagnosisandtreatmentofhepatitisB.PreS1couldbetakenasaneerasechainreactionassay,FQPCR)广泛应用于乙肝病毒DNA的测定，为乙肝病毒的感染、复制及具有传染性提供了最直接的依据.本研究我们将乙肝病毒表面抗原阳性的血清标本同时进行PreS1和DNA测定.freelLEppendorf管，于-20℃冻存.主要试剂:HBVM试剂购自上海实业科

3、华生物技术有限公司.质控血清购自卫生部临床检验中心.PreS1试剂由中国科学院生物化学与细胞生物学研究所上海阿尔法生物技术有限公司提供.HBVDNA试剂盒由中山医科大学达安基因诊断中心生产.引物为P1:5′ATCCTGCTGCTATGCCTCATCTT3′；P2:5′ACAGTGGGGGAAAGCCCTACGAA3′.探针：荧光标记的探针(FProbe)序列为5′RTGGCTAGTTTACAGTGCCATTTGQ3′,R为报告荧光基团;Q为表淬灭荧光基团.主要仪器:瑞士Ausbio生产的“酶免之星”全自动免疫分析仪.美国PE公司生产的PE5700全自动实时荧光定量PCR扩增仪

4、(包括一台9600型热循环仪、荧光光源、检测系统及电脑、应用软件).1.2方法1.2.1乙肝病毒血清标志物（HBVM）的检测采用上海实业科华生物技术有限公司生产的EIA立可读一步法试剂盒，按照说明书的操作步骤及阴阳性判断标准进行编程，其中，HBsAg,HBsAb,HBeAg为夹心法，HBeAb为竞争抑制法，HBcAb为中和抑制法.运用“酶免之星”全自动免疫分析仪，进行检测，试验结果由仪器自动读出.每次实验都加作室内质控，确保实验结果准确可靠.1.2.2PreS1抗原测定按照上海阿尔法生物技术有限公司提供的ELISA操作步骤和结果判定方式进行编程，该实验为两步法，采用双抗体夹心

5、酶联免疫吸附测定法，以固相化的人工化学合成的前S1蛋白21~47aa肽进行免疫制备前S1蛋白单抗捕获标本中的乙肝前S1抗原，辣根过氧化酶标记的抗PreS1单抗为二抗来检测PreS1抗原，同样采用全自动免疫分析仪进行检测.1.2.3HBVDNA测定FQPCR反应步骤如下：常规碱裂解法从血清中提取HBVDNA,0.2mL薄壁反应管中50μL反应液含1.0μmol/L引物、0.1μmol/L的荧光探针(FProbe)，200μmol/L的脱氧核糖核酸、50nkatTaqDNA聚合酶及1×缓冲液.将待检DNA样本或标准阳性模板加入后,.freelin预变性后,按93℃45s和55℃6

6、0s,先做10个循环，最后按93℃30s和55℃45s反复30个循环.同时用拷贝数为1×105,1×106,1×107,1×108/L定标液进行扩增，以扩增前后的荧光差值为纵坐标，拷贝数为横坐标，用ABI7000自动作标准曲线，由电脑软件自动计算出样本HBVDNA初始拷贝数定量结果.由于PreS1，HBVM检测结果均为定性结果，因此将HBVDNA检测结果用定性方式表示（拷贝数＜106/L为阴性，≥106/L为阳性）.统计学处理：采用SPSS8.0统计软件,计数资料采用χ2检验,显著性检验水准为α=0.05.2结果2.1HBVM不同组PreS1抗原检测在HBsAg阳性血清中，P

7、reS1总阳性率为52%，而正常对照组50例全为阴性，阳性率为0.说明PreS1抗原作为一项HBV感染的血清学指标的初步可行性.HBeAg阳性的HBVM第①和第④组PreS1阳性率较高（表1）.2.2HBeAg阳性组与阴性组PreS1抗原检测在上述研究基础上，将HBeAg阳性组和阴性组PreS1抗原检测结果进行比较，χ2=98.3，P0.01，差异有统计学意义，HBeAg阳性组PreS1抗原检出率明显高于HBeAg阴性组(表2).HBeAg和PreS1总符合率为61.6%，说明两者有较好的一致性和相关性