糖基化终产物对人单核细胞emmprin基因表达的影响

《糖基化终产物对人单核细胞emmprin基因表达的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、糖基化终产物对人单核细胞EMMPRIN基因表达的影响【关键词】糖基化终产物；人单核细胞；细胞外基质金属蛋白酶诱导因子；逆转录聚合酶链反应；糖尿病[Abstract]Objective：Toinvestigatetheeffectsofadvancedglycosylationendproducts（AGEs）ontheexpressionofextracellularmatrixmetalloproteinaseinducer（EMMPRIN）inculturedhumanmonocytes.Methods：The

2、culturedhumanmonocytesg·L-1）for24hor200mg·L-1AGEsfor8、16、24and48hrespectively，ediumandBSAasacontrol.ThemRNAexpressionofEMMPRINinhumanmonocytesRNAincellstreatede-dependentmanner.Conclusion：TheAGEsinhibittheexpressionofEMMPRINinculturedhumanmonocytes.[Keyanmonoc

3、ytes；Extracelluarmatrixmetalloproteinaseinducer；Reversetranscriptasepolymerasechainreaction；Diabetesmellitus细胞外基质（extracellularmatrix，ECM）在血管周围及其它组织的积聚是糖尿病慢性血管并发症的主要病理机制之一。细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（extracellularmatrixmetalloproteinaseinducer，EMMPRIN）能刺激细胞外基质金属蛋白酶（matrixm

4、etalloproteinase，MMPs）如MMP-1、MMP-2、MMP-3、膜型基质金属蛋白降解酶（MT-MMP）的表达，从而影响细胞外基质的转归。本研究以人单核细胞为研究对象，观察糖基化终产物（advancedglycosylationendproducts，AGEs）对人单核细胞EMMPRIN基因表达的影响。有助于说明AGEs通过EMMPRIN增加细胞外基质的积聚，从而参与糖尿病慢性并发症的发生。1材料与方法1.1材料牛血清白蛋白（bovineserumalbumin，BSA，AMRESCO产品）；164

5、0培养基（Gibco公司）；胎牛血清（浙江省杭州四季青公司）；DNAＭarkerDL2000，天为时代公司）；EMMPRIN及GAPDH引物由上海生工合成；其他试剂均为国产分析纯。1.2方法1.2.1AGE-BSA的制备BSA浓度为5.0g·L-1，葡萄糖浓度为50mmol·L-1，充分溶解于pH7.4PBS后，过滤除菌，37℃无菌避光孵育90天。PBS溶液透析去除未结合的葡萄糖。同样条件制备不含葡萄糖BSA作为阴性对照。荧光光谱扫描分析鉴定AGEs。其激发波长370nm、发射波长440nm、狭缝为3nm。1.2.

6、2细胞培养及干预实验人单核细胞（U937）用含10%胎牛血清的1640培养液，置37℃、5%CO2的培养箱中培养。将细胞接种于六孔板中，每孔1×104个细胞，待细胞达到次融合状时，换用无血清的培养液饥饿24小时后，分组进行干预，以1640组和BSA组（200mg·L-1）为对照组，每组两个复孔。加入不同浓度的AGEs（50、100、200、400mg·L-1）干预细胞，24小时后收集细胞；以200mg·L-1的AGEs分别干预细胞8、16、24、48小时，以1640组和BSA组（200mg·L-1）为对照组，每组2

7、个复孔。1.2.3RT-PCR检测单核细胞的EMMPRINmRNA的表达采用Trizol法提取各组细胞的总RNA，经紫外分光光度计测定RNA的OD260与OD280在1.60~1.80，1%的甲醛变性凝胶电泳证实总RNA的完整性较好（28s与18s两条电泳带吸光度比值等于1.8∶1.0）。立即取2μg总RNA为模板逆转录，根据文献，由上海生工公司合成EMMPRIN和GAPDH单核苷酸引物。EMMPRIN上游：5’-GGCCAGAAAACGGAGTTCAA-3’，下游：5’-GCGCTTCTCGTAGATGAAGA-

8、3’；GAPDH上游：5’-GGAGTCAACGGATTTGGT-3’，下游：5’-GTGATGGGATTTCCATTGAT-3’。用这两对引物可扩增出长度约为492bp的EMMPRINCDNA片段及长度约为206bp的GAPDHCDNA片断引物合成后用去RNA酶水溶解，工作浓度为10mol/L。选择PCR的循环数28，保证PCR产物在线性增加范围内。PCR