胶体金免疫层析法快速检测流感病毒应用研究论文

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1、胶体金免疫层析法快速检测流感病毒应用研究论文李月越陈杭薇王萍李兵郭文忠【摘要】目的：观察胶体金免疫层析（GICA）法检测流感病毒的效果.方法：用间接免疫荧光法(IFA)作为“金标准”，比较GICA与IFA两种方法对同一份标本甲型及乙型流感病毒检测效果，对GICA法诊断试验做出评价.结果：两种方法的检测结果有较好的一致性，GICA法检测流感病毒与IFA法检测结果之间差异无统计学意义（P0.05）.结论：GICA法操作简单、方便、快速，特异、灵敏，在临床流感病毒抗原的检测中具有较好的应用价值.【关键词】胶体金免疫层析；快速检测；流感病

2、毒A型；流感病毒B型0引言目前检测流感病毒的方法很多，但都存在各种不足，免疫金标记技术是以胶体金作为示踪标志物.freelAb由北京庄笛浩禾生物技术公司提供，有效期内使用.IFA法所使用二抗：异硫氰酸荧光素（FITC）标记山羊抗小鼠IgG购自北京中杉金桥生物技术公司，有效期内使用.1.2方法1.2.1GICA法检测于患者入院24h内进行，使用定制的玻璃试管中加入5mL缓冲液（PBS），一端连接负压吸引器，一端连接细塑料导管，操作时将细导管经鼻腔插入7～8cm到达鼻咽部，接通负压，旋转细导管并缓慢退出，吸取分泌物1～2mL分泌物，后

3、用滴管吹打数次（必要时加入抗粘液剂），然后将细胞悬液离心，弃上清，取沉淀液少许充分溶于裂解液中，用细管吸取裂解液，3～4滴于检测卡加样孔中，10～15min后观察结果，在检测区和对照区各出现一条红色色带为阳性，仅在对照区出色一条红色色带为阴性.1.2.2IFA法检测与GICA法同时进行，将用上述方法取得的同一患者的鼻咽部分泌物离心后弃上清液，取沉淀细胞涂片，风扇吹干后丙酮固定.在制备好的细胞涂片上分别加入FluA,B特异性单克隆抗体20μL，置37℃恒温箱20min，取出后用PBS液冲洗3遍，PB液洗1次，风干.加入FITC标记的

4、二抗，置37℃恒温箱20min，洗片同上.荧光显微镜下观察结果，病毒感染的鼻咽部纤毛柱状上皮细胞质内呈分泌物草绿色荧光，找到3个以上典型感染细胞为阳性.统计学处理：应用SPSS10.0forarχ2检验.2结果2.1GICA法与IFA法比较532例取鼻咽部分泌物分别用GICA法与IFA法检测FluA，B.应用GICA法检出FluA抗原阳性59例次，其中4例IFA法测阴性；应用GICA法检出FluA抗原阴性473例次，其中5例IFA法检测阳性.GICA法检出FluB抗原阳性31例次，其中2例IFA法检测阴性；GICA法检出FluB抗

5、原阴性501例次，其中3例IFA法检测阳性.GICA法检测Flu阳性结果见图1.图1GICA法快速诊断试纸条检测Flu结果2.2临床诊断一致性Kappa检测GICA法检测FluA，B结果与IFA法结果进行一致性检验Kappa分别为0.915，0.916，P=0.000，P0.05.说明用GICA法检测FluA，B与用IFA法检测有较好的吻合性.2.3配对设计的McNemarχ2检验GICA法检测FluA,B结果与IFA法结果采用McNemarχ2检验,P均＞0.05；因此认为GICA法检测FluA，B与用IFA法检测结果之间差异无

6、统计学意义.2.4常用诊断试验评价指标以IFA法为对照组，对GICA法检测流感病毒进行评价,其中灵敏度、特异性、总符合率、Youden指数、阳性预测值计阴性预测值均较高，假阳性率及假阴性率较低，而Kappa值较高，吻合性较好(表1).表1GICA法检测FluA，B的评价指标3讨论流感对人群尤其是儿童、老年人及机体免疫力低下的人群有较高的发病率及致死率，危害很大.流感病毒分为甲、乙、丙三型，其中变异大、危害重的主要是甲型和乙型流感病毒［2］.流感的确诊需要实验室检查证实.目前较为常用检测流感病毒主要有病毒分离培养、酶免疫、免疫荧光及

7、PCR技术［3］.因抗流感病毒药物最好要在起始症状发生48h内使用才能发挥较好疗效，故快速流感检测技术对制定预防措施及指导早期使用抗病毒药物非常重要［4-5］.免疫荧光技术检测病毒抗原已有20多年历史，是快速而准确的方法［6］.而其中IFA法因其具有稳定、敏感、特异性强的优点，目前是诸多快速检测病毒方法中的金标准，但缺点是需价格昂贵的免疫荧光显微镜，工作人员需具有一定的经验.GICA技术具有更简单、快速、准确和无污染等优点，得以快速发展，已在医学、动植物免疫、食品安全监督各领域得到了广泛的应用［7］.该技术为建立了一种快速检测流感

8、病毒方法提供了很好的技术平台［8］.我们以IFA法为检测流感病毒的“金标准”，对GICA法进行评价,结果发现，使用两种方法检测FluA,B结果的总符合率及吻合性较好，两者之间的差异无统计学意义.通过各项评价指标的计算，可以看出GICA法检测流感病毒