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时间:2018-07-07
《依达拉奉对aβ140诱导pc12细胞nfκb、bcl2mrna和蛋白表达的影响》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、依达拉奉对Aβ140诱导PC12细胞NFκB、Bcl2mRNA和蛋白表达的影响【摘要】目的探讨依达拉奉对β淀粉样蛋白(Aβ140)诱导PC12细胞NFκB、Bcl2mRNA和蛋白表达的影响。方法采用CI186对其保护作用。结果模型组中NFκBP65mRNA和蛋白表达水平明显升高,Bcl2mRNA和蛋白表达水平明显降低,与对照组比较有显著差异(P<0.01)。保护组中NFκBP65mRNA和蛋白及Bcl2mRNA和蛋白表达与模型组组间比较有统计学意义(均P<0.05),而与对照组比较无统计学意义(P>0.
2、05)。结论Aβ140可以活化神经细胞内NFκB,减少Bcl2的表达,发生细胞凋亡。依达拉奉可以抑制NFκB激活,增加Bcl2的表达发挥抗凋亡作用,最终达到保护神经细胞的目的。【关键词】依达拉奉;NFκB;Bcl2;阿尔茨海默病;细胞凋亡阿尔茨海默病(AD)是老年人最常见的神经变性疾病,临床表现为进行性痴呆、认知障碍和行为异常。目前资料表明,AD的发生与氧化应激密切相关,氧化应激增加蛋白质氧化损伤和DNA氧化损伤,导致神经元死亡或功能失调,而这种缺失死亡以凋亡为主。 依达拉奉是新型的自由基清除剂,可以特异性清除羟自由基(OH
3、),抑制氧化应激及其继发的细胞凋亡,发挥神经保护作用,目前主要应用在脑梗死早期和脑出血的治疗中。临床发现依达拉奉对部分痴呆患者可能有改善症状的作用,提示依达拉奉是一种具有前途的治疗AD的药物。本实验通过Aβ140蛋白诱导损伤的PC12细胞建立AD细胞模型,探讨NFκB、Bcl2与神经细胞凋亡的关系,为进一步研究AD的发病机制及防治策略提供理论基础。 1材资料与方法 1.1药品与试剂PC12细胞购自中国生命科学院上海细胞所,Aβ140、NFκB引物、Bcl2引物、βactin引物、NC膜、TEMED购自北京鼎国生物公司,NF
4、κBP65抗体、Bcl2抗体购自Sigma公司,DAB显色试剂盒购自博士德公司,依达拉奉购自江苏先声药业有限公司。 1.2方法 1.2.1细胞培养和预处理用含有15%胎牛血清的DMEM培养基(3.7gNaHCO3),置于37℃,5%CO2孵箱中培养,每3天传代1次,传代时用机械方法吹打贴壁的PC12细胞,取生长期细胞用于实验。分为依达拉奉保护组(20μmol/L依达拉奉+Aβ140),Aβ140模型组(30μmol/LAβ140)和对照组(正常PC12细胞)。 1.2.2目的基因mRNA的表达Trizol法提取总RNA。紫外分光
5、光度计测定RNA纯度及含量,28S/18S灰度比约为2∶1。 1.2.3逆转录PCR(RTPCR)法首先mRNA反转录合成cDNA第一链。以上述cDNA为模板,以βactin为内参照,分别对NFκBP65和Bcl2进行PCR扩增。大鼠βactin引物:上游引物:5′ATTTGCACCACACTTTCTACA3′,下游引物:5′TCACGCACGATTTCCCTCTCAG3′(扩增长度380bp)。大鼠NFκBP65引物:上游引物:5′AAGATCAATGGCTACACAGG3′,下游引物:5′CCTCAATGTCT
6、TCTTTCTGC3′(扩增长度493bp)。大鼠Bcl2引物:上游引物:5′CTGGTGGACAACATCGCTCTG3′,下游引物:5′GGTCTGCTGACCTCACTTGTG3′(扩增长度441bp)。 1.2.4l洗膜,10min×3次;显色照相:洗涤后的膜加入1mlDAB显色液,显色10~30min,用水漂洗终止显色,湿润密封4℃保存,待照相记录后,分析结果。 1.3统计学分析所有数据均采用x±s表示,应用SPSS13.0统计软件对各组NFκBP65mRNA和Bcl2mRNA相对水平进行Studentt检验。
7、 2结果 2.1NFκBP65mRNA和Bcl2mRNA的表达模型组中NFκBP65mRNA表达水平明显升高,Bcl2mRNA表达水平明显降低,与对照组比较有显著差异(P<0.01),说明Aβ140能引起PC12细胞NFκBP65mRNA表达上调,Bcl2mRNA表达水平减低,促进细胞凋亡。保护组中NFκBP65mRNA及Bcl2mRNA表达与模型组相反,组间比较有统计学意义(均P<0.05),而与对照组比较均无统计学意义(P>0.05),说明依达拉奉能够下调Aβ140诱导分化PC12细胞NFκBP
8、65mRNA的表达,上调Bcl2mRNA表达水平,抑制细胞凋亡。见图1、表1。表1NFκBP65、Bcl2mRNA表达水平 2.2Western印迹检测NF
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