格拉司琼原位凝胶注射剂的体内释药研究论文

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1、格拉司琼原位凝胶注射剂的体内释药研究论文孙达，王启龙，潘俊芳，张朝晖【摘要】目的研制格拉司琼原位凝胶注射剂并考察其体内释药行为。方法以PLGARG503H(乳酸-羟基乙酸共聚物)为辅料，NMP(N-甲基吡咯烷酮)为有机溶剂制备原位凝胶，皮下注射给药，并采用局部残留量法间接测定其在大鼠体内的累积释放率。结果格拉司琼原位凝胶注射剂1.5h后有突释效应，释放率达17.1%.freel公司);NMP(N-甲基吡咯烷酮)(Sigma公司);甲醇(中国医药集团化学试剂有限公司);丙酮(中国医药集团化学试剂有限公司);流动相为

2、色谱纯，其他试剂均为分析纯。1.3动物雌性SD大鼠,.freell无菌注射器吸取适量凝胶，排出气泡，封装待用。2.2局部残留量测定方法的建立2.2.1波长选择精密称取格拉司琼原料药适量，加二氯甲烷配制成50μg/ml的溶液，以二氯甲烷为空白，照《中国药典》(Ⅱ部)2005年版附录ⅣA项下紫外-可见分光光度法，于200～400nm波长下扫描，结果显示在302nm处有最大吸收。取适量空白凝胶溶于二氯甲烷中，同法扫描，结果在302nm处无吸收。故确定302nm为检测波长。2.2.2色谱条件3,4及系统适用性实验色谱柱：

3、PlatisilODS柱(250mm×4.6mm，5μm);流动相：0.05mol/L醋酸钠缓冲液(含0.28%三乙胺，冰醋酸调节pH=6)-甲醇(55∶45);流速：1ml/min;检测波长：302nm;柱温：25℃;进样量：20μl。在此条件下，格拉司琼的保留时间约为9min，理论塔板数按格拉司琼峰计应不低于4500。2.2.3样品处理在预定时间内处死大鼠，仔细剖开注射部位表皮，将凝胶连同周围组织切取下来，置于匀浆器中，冰浴，加入丙酮4ml，反复研磨10min，用流动相稀释至20ml，涡旋混匀，12000r/

4、min经高速离心15min后，取上清液进样，HPLC检测。2.2.4专属性实验如图1～2所示，肌肉匀浆液中的内源性物质和代谢产物以及载体材料PLGA对主药的测定均不产生干扰。2.2.5标准曲线及定量限取大鼠腹部肌肉加入丙酮适量制成匀浆液待用。配制50μg/ml的格拉司琼溶液待用。取上述匀浆液3ml，分别加入上述格拉司琼溶液0.1，0.2，0.5，1，2，5ml，用流动相稀释至10ml，旋涡混匀，制成浓度为0.5，1，2.5，5，10，25μg/ml的样品溶液，经12000r/min高速离心15min后，吸取上清液

5、进样，作HPLC检测，以峰面积(A)对药物浓度(C)进行线性回归。得回归方程A=12.979C+0.7203(r=0.999979)。结果表明，格拉司琼浓度在0.5～25μg/ml范围内与峰面积线性关系良好，定量限为0.026μg/ml。图1空白肌肉匀浆液加PLGA样品色谱图图2注射格拉司琼凝胶后肌肉匀浆液样品色谱图2.2.6精密度实验取线性项下2.5，5和10μg/ml的标准溶液，分别连续测定6次，计算RSD。结果RSD为1.76%，表明本方法精密度好。2.2.7回收率实验取空白匀浆液3ml，加入适量PLGA(

6、溶于丙酮中)，再分别加入上述格拉司琼溶液0.2，1，5ml，用流动相稀释至10ml，涡旋混匀，配制成浓度为1，5，20μg/ml的样品溶液，经12000r/min高速离心15min后，吸取上清液进样，作HPLC检测。结果见表1。表1回收率实验结果加入浓度/μg·ml-1测定浓度/μg·ml-1回收率(%)平均回收率(%)结果表明格拉司琼回收率良好。2.3大鼠体内累积释放率研究将48只大鼠随机分成8组，每组6只，按照每只33mg格拉司琼原位凝胶的剂量，给予大鼠皮下注射，通过回称注射器中残留的凝胶计算出实际给药量。大

7、鼠回笼饲养，于注射凝胶1.5h，1，2，3，4，5，6，7d后处死大鼠，剖开注射部位表皮，将凝胶连同周围组织切取下来，制成匀浆液，按照“2.2.3”项样品处理方法进行操作，HPLC测定凝胶药物残留量，以此换算出格拉司琼在大鼠体内的累积释放率。局部残留量法间接测定大鼠皮下注射格拉司琼凝胶后的药物累积释放率结果见表2，图3表2格拉司琼在大鼠体内的累积释放率时间累积释放率(%)123456平均值(%)RSD(%)3讨论注射给药的原位凝胶注入体内后，由于温度的变化，迅速由溶液状态转变为半固体状凝胶，药物在扩散作用和凝胶自

8、身降解作用的双重推动下，从凝胶中平稳的释放出来，从而达到缓释作用。格拉司琼口服首过效应明显5，生物利用度低，所以注射型凝胶给药系统有显著优势。图3格拉司琼在大鼠体内的累积释放率本实验所使用的有机溶剂NMP已获FDA批准用于制备注射型原位凝胶植入剂;用于制备格拉司琼原位凝胶的辅料-PLGA是一类很有研究价值和应用前景的生物可降解高分子材料，它由无毒、生物相容的单体聚合而成，