哇巴因对大鼠肾皮质na+k+atp酶活性及多巴胺d1受体mrna表达的影响

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1、哇巴因对大鼠肾皮质Na+K+ATP酶活性及多巴胺D1受体mRNA表达的影响：张玉蓉，袁祖贻，任延平【摘要】目的观察哇巴因对大鼠肾皮质Na+K+ATP酶活性及多巴胺D1受体mRNA表达的影响。方法28只SD大鼠随机分为2组，即哇巴因组[27.8μg/(kg·d)哇巴因腹腔注射]和对照组(生理盐水1mL/d腹腔注射)，每周测量鼠尾动脉血压，共5周。于第3、5周后分2批处死动物，应用分光光度法测定各组大鼠肾皮质Na+K+ATP酶活性，同时采用实时定量PCR(realtimePCR)观察肾皮质中多巴胺D1受体

2、mRNA表达的变化。结果大鼠腹腔注射哇巴因3周后，两组血压无显著性差异，但哇巴因组大鼠肾皮质Na+K+ATP酶活性高于对照组(P<0.01)，多巴胺D1受体mRNA表达低于对照组(P<0.01)。5周后，哇巴因组大鼠血压与对照组相比有显著性差异(P<0.01)，哇巴因组大鼠肾皮质Na+K+ATP酶活性进一步增高(P<0.01)，多巴胺D1受体mRNA表达进一步减低(P<0.01)。结论长期小剂量外周注射哇巴因可使SD大鼠血压持续升高，这一作用与肾近曲小管Na+K+ATP酶活

3、性增加引起水钠潴留有关，多巴胺D1受体可能参与了这一过程。【关键词】Na+K+ATP酶活性;多巴胺D1受体;哇巴因;高血压;钠转运　　MedicalSchoolofXianJiaotongUniversity,Xian710061,China)ABSTRACT:ObjectiveTostudytheeffectsofchronicouabaintreatmentonNa+K+ATPaseactivityandtheexpressionofdopamineD1receptorinratkidneycort

4、ex.MethodsAtotalof28maleSpragueDalydividedintoouabaingroupandcontrolgroup,ineD1receptorinratkidneycortexeasuredbycolorimetricassayandrealtimePCR,respectively.ResultsAfter3ent,themeanSBPdidnotchangesignificantly,buttheNa+K+ATPaseactivityincreased(P<0.01)

5、andtheexpressionofdopamineD1receptordecreased(P<0.01)inparisoneanSBPineD1receptorfurtherdecreased(P<0.01).ConclusionChronicperipheraladministrationofloayberelatedtotheincreasedrenalsodiumretentioninducedbytheincreasedrenalcorticalNa+K+ATPaseactivity.Do

6、pamineD1receptormightbeinvolvedinthisprocess.　　KEYV逆转录酶(PROMEGA)合成cDNA，以cDNA作为realtimePCR的模板。所有的实验重复3次。realtimePCR在ABIPRISM7500PCR仪(AppliedBiosystems,UK)上进行，采用ABI公司的SYBRGreenRealtimePCRMasterMix，进行realtimePCR。为确定模板的质量和引物的特异性，在检测样本之前先测定每个模板与其所对应引物的熔解曲线，确保该

7、曲线只有一个峰，且反应产物中只出现1个特异的预期DNA条带。每个样本分别扩增目的基因和内参照基因，并分别设2个复孔。引物如下D1受体：正向引物5′TCTCCTTTCGCATCCTCACG3′;反向引物5′GCCGCACAGACAAGGGTATT3′;GAPDH(看家基因，体系内参照)序列：正向引物5′ACGGGAAACCCATCACCATC3′，反向引物：5′CGCCAGTAGACTCCACGACAT3′。上述引物均由上海生工生物工程公司设计合成。反应体系：SYBRGreenRealtimePC

8、RMix12.5μL，cDNA1.5μL，上游引物(10pmol/μL)1μL，下游引物(10pmol/μL)1μL，加水至25μL;反应条件：95℃10s，95℃5s，60℃34s，共50个循环。　　1.3.4统计学分析采用SPSS10.0软件。计量资料数据以均数±标准差表示，组间差异性比较采用t检验，以P<0.05为有显著性差异。　　2结果　　2.