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《蛋白免疫印迹法(wb)试验结果及hiv感染关系研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、蛋白免疫印迹法(WB)试验结果及HIV感染关系研究【摘要】目的通过对蛋白免疫印迹法(WB)试验结果的观察,确定个体是否感染HIV以及HIV感染的状况。方法对60份抗-HIV初筛阳性血清使用蛋白免疫印迹法(WB)进行确认实验。结果在被检测样品中,HIV-1型确认试验阳性54例,占90%;HIV-1型确认试验阳性,且提示HIV-2阳性感染1例,占1.6%;HIV-1型确认试验弱阳性(不确定)3例,占5%;HIV-1型确认试验阳性2例,占3.3%。结论蛋白免疫印迹法(WB)试验确定个体有无HIV感染以及HI
2、V感染情况提供依据。【关键词】HIV感染;蛋白免疫印迹法(WB);条带【Abstract】ObjectiveThroughtowesternblotassayobservationofresultofthetest,confirmindividualinfectHIVandHIVinfectthestate.MethodsSafethepositiveserumandusewesternblotassaytoconfirmtocasesof60persist-HIVpositiveforthefirs
3、ttime.ResultsBeingmeasuredinthesample,HIV-1typesconfirmtesting54casesofpositive,takes90%.HIV-1typesconfirmstestingpositive,andpointoutHIV-2infect6onepositively,takes1.6%.HIV-1typesconfirmtestingweakpositive3,takes5%HIV-1typeconfirmtestingnegative2,take3
4、.3%.ConclusionWesternBlotAssaytestoffersbasisonconfirmwhetherindividualshaveHIVisinfectedandHIVinfectthestate.【Keywords】HIVinfect;WesternBlotAssay;Strip作者单位:455000河南省安阳市肿瘤医院检验科艾滋病(AIDS)是一种目前尚无有效治愈方法,病死率极高的传染病,它在全世界的广泛流行已经成为严重的公共卫生问题和社会问题。截止到2007年7月底,我们对
5、60名抗-HIV初筛阳性者进行了蛋白免疫印迹法(WB)确认实验,通过实验结果(蛋白带条)的观察,探讨与HIV感染关系,并且还可以在监控病情进展,观察治疗结果,综合监测和行为干预等方面起到重要作用,现将结果报告如下。1试剂与方法1.1试剂人类免疫缺陷病毒(HIV1+2)型抗体免疫印迹试剂盒(新加坡健利检验诊断私人有限公司提供)。1.2仪器脱色摇床:江苏TS-1。1.3方法过夜孵育法1.3.1试剂的配制1.3.1.1稀释洗涤缓冲液6将1体积的浓缩洗涤缓冲液(20X)加入到19倍体积的双蒸馏水中,充分混匀。
6、1.3.1.2封闭缓冲液1体积的浓缩样品稀释缓冲液加入到9倍体积的双蒸馏水中,充分混匀,每毫升加入1g封闭粉,充分混匀。1.3.1.3酶结合物工作溶液按1:1000比例,用上述配好的封闭缓冲液稀释酶结合物。1.3.2试验步骤:1.3.2.1用镊子小心取出需要的试剂膜,有号码的一端向上,分别放入孵育板槽内。强阳性对照、弱阳性对照、阴性对照各一条。1.3.2.2每槽内加入2ml稀释的洗涤缓冲液,在室温下(25±3)℃将孵育板置摇床上振荡孵育至少5min,以吸引器吸出缓冲液。1.3.2.3在每槽中加入2ml
7、上述配好的封闭缓冲液,随后分别加入2ml患者血清和强阳性、弱阳性、阴性对照。1.3.2.4盖上盖子,于室温下(25±3)℃在摇床上过夜(16～20h)振荡孵育。1.3.2.5小心掀开盖子以避免溅出或样品交叉,以吸引器吸出反应液。不用的样品槽间需要更换吸头以避免交叉污染。1.3.2.6每槽中加入2ml的洗涤缓冲液,每次置摇床上振荡5min。弃洗液,再重复两次。61.3.2.7每槽中加入2ml酶结合物工作液,盖上盖子,于室温下(25±3)℃在摇床上振荡孵育30min。1.3.2.8仔细打开盖子,吸出酶结合
8、物溶液,按步骤6洗涤3次。1.3.2.9每槽中介入2ml底物液,盖上盖子,于室温下(25±3)℃在摇床上振荡孵育15min。1.3.2.10小心打开盖子,吸出底物,以双蒸馏水洗涤3次,以终止反应。1.3.2.11用镊子小心取出试剂膜,放在滤纸上,吸干水分,观察并记录结果。2结果60份抗-HIV初筛阳性(WB)确认试验结果表160份抗-HIV初筛阳性(WB)确认试验结果份数条带形式结果1只检测出p17抗体,没有其他条带阴性1没有出现病毒的特异性条带,只出现
