实验八 高效液相色谱法测定双黄连口服液中黄芩苷的含量

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1、实验八高效液相色谱法测定双黄连口服液中黄芩苷的含量一、目的要求1．练习使用高效液相色谱仪2．学会用外标法定量分析二、实验原理外标法可分为外标一点法、外标二点法及标准曲线法。当标准曲线截距为零时，可用外标一点法进行定量。利用高效液相色谱法进行分离双黄连口服液中的黄芩苷，在λmax274nm处进行检测。在药物分析中，为了减小实验条件波动对分析结果的影响，采用随行外标一点法定量，即每次测定都同时进对照品与供试品溶液。三、仪器与试药1．仪器高效液相色谱仪、超声波提取器、分析天平、微量注射器、ODS-C18反相色谱柱、容量瓶（25ml，50ml）2．试药黄芩苷对照

2、品（中国药品生物制品检定所）、双黄连口服液（三精制药）、甲醇（色谱纯）、冰醋酸（A·R）、双蒸水。四、实验内容与步骤1．色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇－水－冰醋酸（50：50：1）为流动相；检测波长为274nm。理论塔板数按黄芩苷峰计应不低于1500。2．对照品溶液的制备精密称取在60℃减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量，加50%甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，0.45μm滤膜滤过，即得（浓度为0.1216mg/ml）。3．供试品溶液的制备精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇适量，超声处理20分钟，放置至室温，加50%甲醇稀

3、释至刻度，摇匀，0.45μm滤膜滤过，即得。4．样品测定分别精密吸取对照品溶液10μl与供试品溶液5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每1ml含黄芩以黄芩苷计不得少于8mg。五、思考题1、HPLC中常用的定量方法有几种？外标一点法有何优缺点？2、紫外检测器的优缺点是什么？