金樱子对实验性ⅰga肾病大鼠mcp1mrna表达的影响论文

《金樱子对实验性ⅰga肾病大鼠mcp1mrna表达的影响论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、金樱子对实验性ⅠgA肾病大鼠MCP1mRNA表达的影响论文黄艳明舒雨雁韦玉兰【摘要】目的研究金樱子水醇提取液对实验性ⅠgA肾病大鼠肾组织MCP1mRNA表达的影响，了解其作用机制。方法建立ⅠgA肾病大鼠模型，将36只动物随机分成正常组、模型组和治疗组，用RT-PCR方法检测各实验组肾脏组织MCP1mRNA表达。结果MCP1mRNA在3个实验组中的相对表达量分别为：(0.3083±0.1594),(0.8732±0.5017)，(0.4182±0.1933)，与模型组相比，金樱子治疗组能有效抑制MCP1mRNA在肾组织的表达(P＜0.05)。结论金樱子能下调MCP

2、1mRNA在肾脏的表达，减少局部炎症反应.freelRNAinratexperimentalⅠgAnephropathymodelrenaltissueatlevelofgeneechanismofaction.MethodsAfterIgAnephropathymodelintonormalgroup,modelgroupandtreatmentgroup.TheexpressionofMCP1mRNAinrenaltissuebyRT-PCRmethods.ResultsTheexpressionofMCP-1mRNAinthreegroupsodelgroup,

3、RosaLaevigataMichxcouldinhibittheexpressionofMCP1mRNA`inrenaltissue(P＜0.05).ConclusionRosalaevigataMichxcandecreasetheexpressionofMCP1mRNAinkidney,diminishlocalinflammatoryreaction,relieverenallossandprotectrenalfunction.Keyonocytechemoatracttantpretein1,MCP1)mRNA的影响。1材料与方法1.1材料健康远交系雄

4、性SD大鼠36只，体重180～200g，由广西医科大学实验动物中心提供；牛血清白蛋白、Trizol、逆转录试剂盒由深圳晶美生物工程有限公司提供；葡萄糖球菌肠毒素（SEB）由军事医学科学院提供；TaqDNA聚合酶、dNTP由Takara生物公司提供。1.2方法1.2.1动物分组动物适应性饲养1周，检测尿蛋白，随机将36只SD大鼠分成正常组12只、模型组12只和金樱子治疗组12只。1.2.2ⅠgA肾病大鼠模型的建立除正常组外，其余各组隔日用0.1%BSA酸化水（0.1%稀盐酸配制）100mg/kg灌服，至处死日。第6,7两周，每周连续3d10mg/kg尾静脉注射1%BSA缓冲

5、液（无菌生理盐水配制），第8～10周，1次/周,0.4mg/kg尾静脉注射SEB（无菌盐水配制）。正常组隔日饮用酸化水，第6～10周尾静脉注射与造模等量等次的生理盐水，然后观察至第15周。1.2.3给药方法动物给药从第11周开始，治疗组用金樱子水醇提取液按1ml/200g灌服；模型组和正常组每日用生理盐水灌服至处死日。其中模型组1只大鼠在尾静脉注射后第3周持续异常瘦弱摄食减少而死亡，已从实验中剔除。1.3大鼠MCP1mRNA检测1.3.1肾组织总RNA提取按照总RNA提取试剂盒说明书进行。1.3.2RTPCR引物的设计与合成：MCP-1引物由上海生工生物公司设计合成，

6、上下游引物序列分别为5'-ATGCAGGTCTCTGTCACG3'，5'CTAGTTCTCTGTCATACT-3'，扩增产物长度为450bp。βactin引物为内参，由上海生工生物公司合成，上下游引物序列分别为5'CTATCGGCAATGAGCGGTTC3'，5'CTTAGGAGTTGGGGGTGGCT-3'，扩增产物长度为762bp。cDNA合成：于一离心管中先加入总RNA11μl，随机引物1μl,PCR反应仪70℃5min,.freelM)2μl，Ribonucleaseinhibitor1μl，37℃5min。然后加入MMULV（200u/μl）1μl，

7、轻轻混匀，42℃温育60min，72℃10min灭活逆转录酶，-20℃保存备用。多聚酶链反应：取上述各组逆转录产物按下列顺序加样：cDNA模板2μl，TaqDNA聚合酶2U，βactin上下游引物各1μl，MCP1上下游引物各1μl，Buffer2.5μl，dNT1μl，用无菌水补齐至25μl。PCR反应仪上运行下列操作：95℃预变性5min，95℃变性30s，56℃30s，72℃30s，35个循环，72℃7min。PCR产物在2%的琼脂糖凝胶上电泳：用β-actin作内参照，紫外凝胶成像分析仪对电泳条带成像并保存，Qua