黄芪总苷对脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体作用的研究论文

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1、黄芪总苷对脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体作用的研究论文黄可儿李燕舞王汝俊王建华【关键词】黄芪总苷／药理学；,,受体,胃肠激素；,,脾虚；,,疾病模型,动物；,,大鼠摘要：【目的】观察黄芪总苷(AST)对脾虚大鼠胃壁细胞胃泌素受体结合位点数变化的调控作用。【方法】SD大鼠采用胃饲大黄液(10?g/kg)方法复制脾虚模型；采用LeL脾虚模型大鼠胃壁细胞悬液中加入AST20?μＬ体外孵育，并设正常对照组与模型组；采用放射配基结合法检测壁细胞胃泌素受体结合位点数。【结果】模型组壁细胞胃泌素受体结合位点数下降，

2、与正常对照组比较具有显著性差异（Ｐ＜００５）；AST高剂量组可上调胃泌素受体结合位点数，与模型组比较具有显著性差异（Ｐ＜００５）。【结论】黄芪总苷可增加脾虚模型大鼠因脾虚而降低的胃壁细胞胃泌素受体结合位点数，可能是黄芪发挥益气健脾作用的主要有效成分(部位)。关键词：黄芪总苷／药理学；受体，胃肠激素；脾虚；疾病模型，动物；大鼠黄芪是补中益气汤中的君药。既往研究显示补中益气汤对大黄所致“脾虚”大鼠低下的泌酸功能有一定的提升作用［１］；采用黄芪注射液腹腔注射对大黄、利血平所致的“脾虚”大鼠降低的胃壁细

3、胞胃泌素受体结合位点数有提升作用［2-3］。作为黄芪主要有效部位的黄芪总苷(astragalosides,AST).freela);XDS1倒置生物学显微镜(重庆光学仪器厂)；HYS4型多头细胞收集器(上海跃进医疗器械厂)；2XZ05型旋片真空泵(浙江临海市精工真空设备厂)；DP5500型γ计数器(Beckman)等。13主要试剂与药品链霉蛋白酶(Pronase,BoehringerMannheim)；牛血清白蛋白(BSA，华美生物工程公司)；乙二胺四乙酸(EDTA，汕头市化学试剂厂)；羟乙基哌

4、嗪乙磺酸(HEPES，Pharmacia);二硫苏糖醇(DTT，华美生物工程公司)；硅化聚乙酰胺吡咯烷酮(Percoll,.freelacia);胃泌素标准品(纯度为97%，Sigma)；１２５Ｉ胃泌素(比活度为629×１０８?Bqmol－１L－１，放化纯度为963%，批号为200503，中国原子能科学研究院同位素室提供)；黄芪总苷由上海沪丰生物科技有限公司研究所提供，批号为20041021，含黄芪甲苷1021%；大黄由广州中医药大学第一附属医院药剂科提供，经鉴定为唐古特大黄；其他化学品均为国产

5、分析纯。14动物分组与造模［４］SD大鼠随机分成正常对照组、脾虚模型组。模型组以大鼠1?kg/L大黄液灌胃(10?g/kg)，2次／d，连续14?d；各组动物常规喂养，自由饮水。第15天上午处死，实验前不禁食。15大鼠胃壁细胞的分离与纯化［５］采用胃袋法分离大鼠胃壁细胞，经Percoll纯化后，台盼兰排除试验鉴定，细胞活率可达到95%，细胞涂片苏木素―伊红(HE)染色后鉴定细胞纯度可达70%～75%，调整细胞浓度为?２×１０6／Ｌ。16黄芪总苷的体外孵育设AST高、中、低3个剂量组，用9?g/L

6、生理盐水配成浓度分别为10、20、30?g/L，在每2?mL脾虚模型大鼠胃壁细胞悬液中加入AST?２０?μL，正常对照组及模型对照组则加入PBS?20?μL；37℃孵育30?min，并振荡100?r/min，1?000?r/min离心5?min，弃去上清，用Medium?C(MC)液重新混悬，并保持2?mL的体积，进行放射配基结合实验。17放射配合结合实验［6］根据既往基础试验确定１２５Ｉ?胃泌素饱和终浓度为100?pmol/L，并以此为基础进行单点结合实验，求出各组大鼠胃壁细胞特异结合位点数。

7、每样品均做总结合管(TB)、非特异性结合管(NSB)两组复管，加样后37℃孵育30?min，加冷MC液720?μL中止反应，迅速用多头细胞收集器抽滤至玻璃纤维滤膜，并用冷MC液每管2?mL淋洗滤膜3次。烘干滤膜后，用统一打孔器将滤膜打孔，并置于一次性塑料测定管中进行γ计数。胃泌素受体放射配基结合实验中总结合管(TB)、非特异性结合管(NSB)的加样顺序见表1。18壁细胞胃泌素受体结合位点数(n)的检测根据放射配基结合实验所检测nTB与nNSB之差计算特异性结合nSB，再以nSB与仪器计数效率(7

8、0%)之比计算n蜕变，以n蜕变与标记物放射性比活度α之比与ncell之积计算结合容量，然后根据结合容量进一步计算得出壁细胞结合位点数，计算公式如下：nSB＝nTB-nNSB，n蜕变＝nSB／07，结合容量＝（n蜕变／α）×２２２×１０６×ncell，壁细胞结合位点数n＝结合容量×６02×10１４。19统计分析采用SPSS?110统计软件，以pareMeans：one］．北京：军事医学科学出版社，1995：183．［2］聂克，王汝俊，王建华，等．脾虚大鼠胃壁细胞胃泌素受体结合容量及黄芪对其调控作用