开郁健脾法对脾虚大鼠血清胃泌素、尿d-木糖影响的实验研究

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1、开郁健脾法对脾虚大鼠血清胃泌素、尿D-木糖影响的实验研究【摘要】目的观察具有开郁健脾功效中药复方对脾虚大鼠体质量、血清胃泌素、尿D-木糖排泄率的影响。方法以破气苦降加饥饱失常的方法建立脾虚证大鼠模型,随机分组，实验组中药复方煎剂灌胃，以ELISA法测定大鼠血清胃泌素,间苯三酚法测定D-木糖排泄率。结果(1)与模型组比较，中药复方低、中、高剂量组体质量明显增长(P<0.01)。(2)与模型组比较，中药复方低、高剂量组、中剂量组尿D-木糖排泄率显著增高(P<0.05、P<0.01)。结论开郁健脾中药复方有

2、促进胃肠吸收的作用。【关键词】小儿厌食;血清胃泌素;尿D-木糖排泄率;开郁健脾;中药复方小儿厌食是指小儿较长时期见食不贪、食欲不振、厌恶进食的病症，是儿科门诊常见病之一，城市儿童发病率较高，各年龄儿童均可发病，尤以1～6岁小儿多见[1]。笔者长期跟随导师出诊，导师擅长运用开郁健脾之法治疗小儿厌食，每获良效。为探讨开郁健脾法组成中药复方的疗效机理,参照曾益宏等人的方法建立大鼠脾虚模型[2]，以开郁健脾中药复方为施加因素，探讨其疗效机理。　　1材料与方法11　　1.1动物与分组　　选用SD大鼠40只[雌雄各半,(180±2

3、0)g，由辽宁中医药大学实验动物中心提供，实验动物使用许可证：SCXK(辽)2009-2005]，将大鼠随机分为5组，分别为正常组，模型组，中药复方低、中、高剂量组，每组8只，分笼饲养，自由饮水。饲料采用标准颗粒饲料(由辽宁中医药大学动物实验室提供)。　　1.2主要试剂和仪器　　大鼠胃泌素试剂盒(RD公司生产，批号09-04)，D-木糖试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号20090722)，紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司，T6新世纪),全自动酶标仪(奥地利安图公司，2010)。　　1.3药物制备　　(

4、1)造模药物制备。小承气汤：大黄∶厚朴∶枳实=4∶5∶3。常规煎法，然后浓缩至500%。(2)实验药物制备。中药复方：党参12g、白术9g、半夏6g、鸡内金9g、炒麦芽9g、山楂9g、厚朴7g、郁金9g。常规煎法，然后浓缩至低剂量浓度116.711%、中剂量浓度350%、高剂量浓度525%，冷冻保存。　　1.4造模方法　　采用破气苦降法加饥饱失常复制脾虚动物模型[3-4]，本模型是继大黄致脾虚模型之后比较广泛的脾虚模型[3]。各组大鼠除了正常组外每日灌饲小承气汤50g/kg，隔日半量进食，自由饮水，造模15d结束，测量

5、大鼠的体质量，以大鼠体质量下降10%～15%)为造模成功(与对照组比较)。　　1.5给药方法　　正常对照组与模型组自由饮水，不限制饮食，分笼饲养。中药复方低剂量组、中剂量组按1mL/100g、每日1次灌胃，高剂量组按1mL/100g、每日2次灌胃，连续给药4周。　　1.6血清胃泌素测定　　中药复方低、中、高剂量组在最后1次给药后禁食24h，正常组与模型组禁食24h，各组均不限制饮水，术前给予各组大鼠10%水合氯醛腹腔注射1mL/100g，大鼠麻醉后仰卧手术台上，用手术剪剪开腹腔，找到腹主动脉，用注射器从腹主动脉采血21

6、1mL，快速离心分离血清，按说明书由辽宁中医药大学免疫室测定。　　1.7尿D-木糖排泄率测定　　采用间苯三酚法[6]，最后1次给药后，各组大鼠禁食不禁水12h,3%D-木糖溶液灌胃,每只1mL/100g,然后收集5h尿液(期间禁食不禁水)，记录尿量。取尿液5μL,测试前将尿液用蒸馏水9倍稀释至50μL检测,加入间苯三酚试剂3mL,分别加入蒸馏水0.05mL(试剂空白管)，收集未服D-木糖尿液(测定空白管)0.05mL，1.33mmol/LD-木糖标准应用液0.05mL(标准管)，测定血清0.05mL(测定管)，各管同时

7、放入100℃沸水中煮沸4min，取出立即放冰水中冷却，混匀后，554nm波长，水调零比色，测各管吸收光度OD值。　　计算公式：尿木糖(mmol/L)=(测定管OD值-测定空白管OD值)/(标准管OD值-试剂空白管OD值)×标准管浓度(1.33mmol/L)×标本测定前稀释倍数(10倍)。　　5h尿D-木糖排泄率=尿木糖(mmol/L)×150×5h尿量(L)×1/1000/大鼠灌D-木糖mL×3%。　　1.8统计方法11　　采用统计软件SPSS11.5进行统计分析，数据以±s表示，大鼠体质量、血清胃泌素、尿D-木糖排泄

8、率以单因素方差分析进行统计分析。　　2结果　　2.1大鼠造模前后体质量下降率　　模型组、中药复方低、中、高剂量组与正常组比较，差异有高度统计意义(P<0.01)，体质量下降率>10%,造模成功。见表1。　　2.2模型组与实验组治疗前后体质量增长率比较　　中药复方低、中、高剂量组与模型组比较，差异有高度统计意义(P<