过量碘化物对原代培养的猪甲状腺细胞凋亡的作用论文

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1、过量碘化物对原代培养的猪甲状腺细胞凋亡的作用论文.freelaryculturedpiganditsmechnism.MethodsDA含量。亚二倍体峰（凋亡）细胞比率表示细胞的凋亡率。1.7统计学分析实验所得数据用均数±标准差表示，应用统计软件SPSS11.5进行单因素方差分析。2结果2.1甲状腺细胞的形态学观察甲状腺细胞是腺体上皮细胞，20～24h贴壁生长，细胞呈多边形、圆形；２～3天可见典型的滤泡结构，5～6天细胞铺满单层。加入KI６～8h滤泡结构开始改变，细胞有分散倾向；24h后无典型滤泡结构，有的细胞变小、变圆，核内出现碎片；48h后可见漂

2、浮的细胞，以后改变不明显。2.2细胞凋亡的荧光显微镜观察阳性对照组及实验组的凋亡细胞核内可见致密浓染的黄绿色染色，呈圆形、月牙形，可见发泡现象及凋亡小体。阴性对照组细胞核内呈均匀的黄绿色染色。2.3琼脂糖凝胶电泳电泳结果显示：阳性对照组、KI组见明显的凋亡条带，呈云梯状；高浓度的梯状带较明显。阴性对照组无云梯状带(见图1)。2.4细胞凋亡率测定流式细胞仪分析表明在不同KI浓度组DNA直方图上显示：随浓度的升高二倍体峰（G0/G1期）细胞减少（P0.05），亚二倍体峰（凋亡）细胞升高（P0.05）。见表1。2.5脂质过氧化程度测定培养细胞加入过量的KI

3、后，脂质过氧化产物MDA的量随浓度的升高而升高（P0.05）。见表2。表1在不同浓度KI作用下凋亡细胞（Ap）、G0／G1细胞所占比率（%，±s）注：不同浓度的KI组间比较，*P0.05，△P＞0.05表2不同浓度碘化钾作用下MDA含量（nmol/mg，±s）注：不同浓度的碘化钾组间比较，*P0.052.6相关性分析从培养甲状腺细胞的细胞脂质过氧化产物MDA与细胞凋亡率的散点图上可见，细胞脂质过氧化水平与细胞凋亡率呈显著正相关，r=0.993，P0.01。3讨论自然界中与甲状腺激素合成有关的碘主要是碘化钠、碘化钾。碘化物在人类的日常生活中具有重要的意

4、义，但过量碘化物对在体甲状腺组织及培养的甲状腺细胞都存在毒性效应［1～4］。本实验猪甲状腺细胞培养24h，加入过量碘化钾，甲状腺滤泡及细胞形态出现改变，细胞发生凋亡，反映了过量碘化物的细胞毒性效应。过量碘化物的这种毒性效应机制至今尚未阐明。细胞坏死和凋亡是细胞两种截然不同的死亡方式，但在某些情况下二者的区分较困难，尤其对培养细胞。当以细胞凋亡诱导剂进行凋亡诱导时，开始细胞以凋亡为特征，随着诱导时间的延长或诱导剂浓度的增加，凋亡后期的细胞发生继发性死亡的改变，称为细胞凋亡性坏死，即凋亡细胞出现肿胀、空泡化，甚至胞膜发生破裂［5］。过量碘化物引起培养甲状

5、腺细胞形态、超微结构、电位的改变，是细胞凋亡在不同阶段的表现形式［1～4］。Vitale等研究过量碘化钾对体外培养的甲状腺TAD-2细胞系及人正常甲状腺细胞的作用，认为在实验中出现的甲状腺细胞凋亡和坏死，是一个细胞凋亡的过程，坏死是细胞凋亡性坏死［1］。本实验中过量碘化钾诱导了原代培养的猪甲状腺细胞凋亡；且细胞凋亡率随浓度的升高而上升，呈剂量依赖关系，与Vitale的报道相符。人们早已发现丙基硫氧嘧啶、甲硫咪唑、高氯酸等抑制过量碘化物对甲状腺细胞的毒性作用，阻滞细胞的坏死和凋亡［1，4］。推断碘离子的代谢过程可能与碘化物诱导的细胞凋亡有关。甲状腺滤泡

6、上皮细胞可浓缩I-，过氧化物酶在氧化I-过程中生成活性很高的自由基引起质膜中脂质过氧化，导致线粒体内活性氧的产生并释放，诱导细胞凋亡。本实验中MDA、细胞凋亡率均随碘化物浓度的升高而升高，推测加入过量碘化钾后，质膜中脂质过氧化导致活性氧的释放，诱导培养的甲状腺细胞凋亡，其途径可能通过活性氧机制。过量碘化物诱导的甲状腺细胞凋亡的过程中，检测到的细胞色素C、活性氧、Caspase酶、Bcl家族蛋白提示了线粒体在这种细胞凋亡中可能起重要的作用［1，2，6］。从左到右阴性对照组、阳性对照组、实验组(KI1、60、100mmol/L)图1对照组、阳性组及实验

7、组琼脂糖凝胶电泳结果【