异甘草素对hela细胞氧化还原状态的影响论文

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1、异甘草素对Hela细胞氧化还原状态的影响论文陈朋，张娟，王振华，郑秋生【摘要】目的探讨异甘草素体外抗氧化作用及其对Hela细胞氧化还原状态的影响，考察异甘草素抑制宫颈癌Hela细胞增殖与活性氧的关系。方法采用化学方法测定异甘草素对羟自由基，DPPH，超氧阴离子清除率和抑制脂质过氧化的抑制率，考察其抗氧化效果;SRB法测定细胞活力.freelg/L抗氧化，高于7.5mg/L浓度促氧化的变化。结论异甘草素浓度依赖性地抑制宫颈癌Hela细胞的增殖;异甘草素低浓度时清除细胞内活性氧，高浓度时促进自由基的生成，

2、促进Hela细胞凋亡。【关键词】异甘草素;体外抗氧化;自由基;活性氧Abstract：ObjectiveToinvestigatetheinfluenceofisoliquiritigenin(ISL)ontheoxidative-reductivestateinHelacellsandtostudytherelationshipbetethodinetheeffectofISLonthescavengingrateofhydroxylradical,DPPH,superoxideanionandon

3、theinhibitionrateoflipidperoxidation.TheintracellularROSlevelseasuredercialtestkits.ResultsISLhadstrongantioxidantactivitiesinvitroandinhibitedtheproliferationofHelacellsinaconcentration-dependentmanner.SF(苯甲基磺酰氯,北京拜尔迪生物公司);超氧化物歧化酶(SOD)测试盒、过氧化氢酶(CAT)测试盒

4、、均为南京建成生物工程研究所产品;1，1-二苯基-2-苦肼基自由基(Sigma公司);Tris(北京拜尔迪生物公司);2-硫代巴比妥酸(上海科丰化学试剂有限公司);焦性没食子酸(天津市富宇精细化工有限公司);邻二氮菲(天津市天新精细化工开发中心);菲咯嗪(合肥博美生物科技有限责任公司);亚油酸(Sigma公司);硫氰酸铵(天津科盟化工工贸有限公司);其余试剂均为分析纯。宫颈癌Hela细胞，新疆特种植物药资源教育部重点实验室。1.2仪器多功能酶标仪(Thermo3001VARIOSKANFLASH);A

5、R-2140型万分之一电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司制造);CO2培养箱(Forma3110，USA);TGL20M台式高速冷冻离心机(湖南凯达科学仪器有限公司);蔡司荧光倒置显微镜。2方法2.1ISL体外抗氧化方法2.1.1对羟自由基的清除作用6Fenton反应测定羟自由基清除率。空白组：20μl7.5mmol/L邻二氮菲溶液，40μl0.15mol/L的PBS(pH=7.4)，100μl蒸馏水，20μl7.5mmol/L的硫酸亚铁，20μl的1%的H2O2充分混匀。37℃水浴中60min，在

6、536nm处，测定吸光度为A1;空白对照组：以20μl蒸馏水代替H2O2重复上述操作，测定吸光度为A2;样品组：以100μl的样品溶液(终浓度为6.25，12.5，25，50，100mg/L)代替100μl蒸馏水重复空白组操作，测定吸光度为A3;样品对照组：40μl0.15mol/L的PBS中加100μl的样品，60μl的蒸馏水，测定吸光度为A4;空白参比组：40μl0.15mol/L的PBS加入160μl的蒸馏水，测定吸光度为A5，平行测定3次。清除率(%)=(A3-A4-A1+A5)/(A2-A1

7、)×100%2.1.2对DPPH的清除作用7100μl0.06mmol/L的DPPH乙醇溶液中加入100μl样品溶液(终浓度为6.25,12.5,25,50,.freelg/L)，分别计算清除率。清除率(%)=A0-(A1-A2)/A0×100%式中：A0为DPPH溶液100μl+无水乙醇100μl的吸光度;A1为DPPH溶液100μl+样品溶液100μl的吸光度;A2为样品溶液100μl+无水乙醇100μl的吸光度。2.1.3对超氧阴离子的清除作用8取浓度为0.05mol/L的Tris-HCl(pH

8、=8.2)缓冲液100μl，25℃预热20min，加入50μl样品溶液(终浓度为6.25,12.5,25,50,100mg/L)，立即加入40μl的3mmol/L的邻苯三酚，振荡使之充分反应，4min后，用10μl的3mol/L的HCl终止反应，在325nm处测定吸光度(A1)，平行测定3次。模型对照组(A0)用50μl的蒸馏水代替样品液。空白对照组(A2)用40μl的蒸馏水代替邻苯三酚。清除率(%)=(A0-A1+A2)/A0×100%2.1.4对卵黄