三氧化二砷对多发性骨髓瘤骨髓基质细胞增殖及分泌细胞因子的影响论文

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1、三氧化二砷对多发性骨髓瘤骨髓基质细胞增殖及分泌细胞因子的影响论文.freelol/L）处理，用MTT法检测细胞活性.freelol/L，但对BMSC的生长无影响；MM患者BMSC高分泌IL-6、VEGF，经As2O3作用后BMSC分泌IL-6、VEGF降低，骨髓瘤细胞和BMSC相互作用导致的过量IL-6、VEGF分泌也可被As2O3抑制，其抑制程度与对照组相比有显著性差异（P0.05）。结论：As2O3不能抑制BMSC的生长，但可以抑制其分泌IL-6及VEGF。【关键词】多发性骨髓瘤EffectofA

2、rsenicTrioxideonBoneMarroalCellsofPatientsaAbstractToexploretheeffectofarsenictrioxide（As2O3）ongroarroacells(BMSC)fromthepatientsultiplemyeloma(MM).SpecimensofbonemarroMMpatientsanMMcelllineCZ-1ol/L）.Cellgroeasuredol/L.As2O3didnotinhibitthegroMMpatients

3、.CytokineproductionofBMSCtreatedultiplemyeloma;arsenictrioxide;bonemarroalcell;cytokine多发性骨髓瘤（multiplemyeloma，MM）目前仍不能被治愈，骨髓基质细胞（bonemarroalcells，BMSC）在MM的发病机制中起着重要作用，自分泌和旁分泌的细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、血管内皮细胞生长因子（vascularendothelialgrool/L的储存液，过滤除菌，分装后置4℃保存，使用前用

4、RPMI1640培养液稀释。骨髓基质细胞分离培养参考杨吉成等BMSC培养方法［1］并作了修改，于髂后上棘取MM患者骨髓5ml，肝素抗凝，Ficoll-Hypaque梯度法分离单个核细胞。培养液洗涤2次，用含有10%胎牛血清的RPMI1640培养液，于37℃、5%CO2、饱和湿度条件下静置培养。每3-4天半量换液。待贴壁的骨髓基质细胞形成单层后，用2.5g/L胰蛋白酶消化传代。取少量细胞加入放有灭菌盖玻片的6孔板培养，待其贴玻片生长后，取出爬片进行碱性磷酸酶（ALP）染色。光学显微镜下观察ALP阳性细胞

5、。细胞系的培养人多发性骨髓瘤细胞株CZ-1（第二军医大学长征医院侯建教授馈赠）用含10%小牛血清的RPMI1640培养液于37℃、5%CO2、饱和湿度条件下培养，3-4天传代1次。细胞生长抑制检测96孔板接种细胞3×104/孔，加入终浓度分别为1、2、5、10、20μmol/L的As2O3，每一浓度设4个复孔。培养48小时后，每孔加入5mg/ml的MTT（Sigma公司）液10μl，继续孵育4小时，离心去上清，加入二甲亚砜（DMSO）50μl/处吸光度（A）值。根据A值计算细胞活性，并计算细胞生长抑制

6、50%的As2O3浓度，即IC50值。培养上清细胞因子检测将BMSC以2.5g/L胰蛋白酶消化制成细胞悬液，种入24孔板，2×104/孔。按实验设计要求加入As2O3，使体系的体积为450μl/ol/L，对照组不加As2O3。按同种方法接种CZ-1及CZ-1+BMSC细胞，CZ-1+BMSC组每孔加入CZ-1和BMSC各2×104个，加入As2O3使终浓度为1、5、10μmol/L。细胞于37℃、5%CO2、饱和湿度条件下培养24小时后，取离心后的培养上清于-20℃保存、待测。用ELISA法测定IL-

7、6、VEGF水平。在酶标仪（Bio-Rad680）上读取每孔的吸光度（A）值。取复孔浓度的平均值。统计学分析用SPSS10.0统计学软件分析数据，药物处理前后的显著性差异用Mann-SC中ALP阳性细胞为（75.2±4.5）%。骨髓基质细胞由细胞群体组成，主要包括成纤维细胞、内皮细胞、成骨细胞、巨噬细胞等，它们均表达碱性磷酸酶，我们所获得的细胞ALP阳性率为（75.2±4.5）%，说明所得细胞主要为骨髓基质细胞。As2O3对骨髓瘤细胞株CZ-1及BMSC的生长影响用MTT法检测细胞活性显示：经不同浓度

8、As2O3作用48小时后的CZ-1，细胞生长受抑制，抑制作用随浓度增加而增强，与对照组比较有显著差异（P均0.05）。48小时后细胞生长抑制50%的浓度（IC50）为2.3μmol/L（图1）。以同样的方法检测As2O3对MM患者及健康人BMSC生长的影响，发现As2O3作用48小时后MM患者及健康人BMSC均未受到明显的抑制，即使在较高的浓度（20μmol/L）下对生长的抑制20%，与对照组细胞活性比较无显著性差异（P=0.45）。As2O3对BMSC