ｃ２ｃ１２成肌细胞体外诱导分化为肌管的论文

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1、Ｃ２Ｃ１２成肌细胞体外诱导分化为肌管的论文【摘要】【目的】观察低浓度马血清体外诱导成肌细胞ｃ２ｃ１２向成熟肌细胞分化、形成肌管的作用，探索定向诱导肌分化的途径及其分子机制。【方法】将ｃ２ｃ１２成肌细胞用含不同浓度马血清的高糖ｄｍｅｍ培养基培养，收集细胞，在相差显微镜下观察形态变化，并通过免疫细胞化学（ｉｍｍｉｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｉｃｃ）及ｒｔ-ｐｃｒ方法分别检测肌性相关基因表达的改变。【结果】①２０ｍｌ／ｌ和５０ｍｌ／ｌ的马血清均能促使ｃ２ｃ１２细胞形成肌小管，２０ｍｌ／ｌ浓度马血清诱导效率最好（第７天时肌小管形成率分别为３１．４％±２．１％和１９．０％±１．６％，ｐ＜０．０

2、０１）。②２０ｍｌ／ｌ马血清诱导３～４ｄ开始有肌管形成，之后肌管越来越多，到８～９ｄ达高峰（第９天４０．２％±１．３％），往后细胞逐渐衰老死亡。③２０ｍｌ／ｌ马血清诱导ｃ２ｃ１２细胞向成熟肌细胞分化过程中，肌相关蛋白分子表达发生变化：结蛋白（ｄｅｓｍｉｎ）、成肌分化抗原（ｍｙｏｄ）、生肌素（ｍｙｏｇｅｎｉｎ）和肌球蛋白（ｍｙｏｓｉｎ）等表达逐渐增强（未刺激时分别约为４９．６％±１．１％、２３．４％±１．１％、４．８％±１．６％和２．６％±１．５％；第６天时分别提高为８０．４％±１．８％、８５．４％±１．１％、２２．２％±１．１％和２６．０％±１．６％；ｐ＜０．００１）；ｄｅｓｍｉｎ、ｍｙ

3、ｏｄ和ｍｙｏｇｅｎｉｎ相应的ｍｒｎａ分子也可以通过ｒｔ-ｐｃｒ检测到。.【结论】①低浓度的马血清能够有效刺激ｃ２ｃ１２成肌细胞向成熟细胞分化，以２０ｍｌ／ｌ浓度效果最好；②ｃ２ｃ１２细胞是研究肌细胞发育分化的理想模板；③肌分化发育过程比较复杂，许多因素都可能起影响，研究设计要尽量标准化。【关键词】成肌细胞；肌细胞；肌管；定向分化；基因表达ｉｎｖｉｔｒｏｉｎｄｕｃｅｍｅｎｔｏｆｃ２ｃ１２ｍｙｏｂｌａｓｔｓｉｎｔｏｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｍｙｏｔｕｂｅｓｃｈｅｎｙｏｎｇ-ｌｅ１，ｚｈｏｕｇｕａｎｇ-ｑｉａｎ２，ｄｅｎｇｙｕ-ｂｉｎ１，ｚｈｉｗｅｉ２，ｘｉｅｈｕｉ-ｑｉ２，ｄｅｎｇｌ

4、ｉ２，ｙａｎｇｚｈｉ-ｍｉｎｇ２，ｗａｎｇｙａ-ｚｈｕ１（１．ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆｐａｔｈｏｌｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，ｓｕｎｙａｔ-ｓｅｎｍｅｄｉｃａｌｓｃｈｏｏｌ，ｓｕｎｙａｔ-ｓｅｎｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１００８９，ｃｈｉｎａ；２．ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆｓｔｅｍｃｅｌｌｓａｎｄｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｈｕａｘｉｈｏｓｐｉｔａｌ，ｓｉｃｈｕａｎｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ｃｈｅｎｇｄｕ６１００４１，ｃｈｉｎａ）ａｂｓｔｒａｃｔ：【ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】ｔｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｒｏｌｅｏｆｌｏｗｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｈｏｒｓｅｓｅｒｕｍｏｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏ

5、ｎｉｎｄｕｃｅｍｅｎｔｏｆｃ２ｃ１２ｍｙｏｂｌａｓｔｓｉｎｔｏｍａｔｕｒｅｍｙｏｃｙｔｅｓａｎｄｃｏｎｓｅｑｕｅｎｔｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｍｙｏｔｕｂｅｓ，ｅｘｐｌｏｒｉｎｇａｍｅｔｈｏｄｆｏｒｃｏｍｍｉｔｔｅｄｍｙｏｇｅｎｉｃｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，ａｎｄｉｔｓｒｅｌａｔｅｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．【ｍｅｔｈｏｄｓ】ｔｈｅｃ２ｃ１２ｍｙｏｂｌａｓｔｓｗｅｒｅｃｕｌｔｕｒｅｄｉｎｈｉｇｈｇｌｕｃｏｓｅ-ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｄｍｅｍｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｅｄｗｉｔｈｖａｒｉｏｕｓｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｈｏｒｓｅｓｅｒｕｍ，ｔｈｅｎｈａｒｖｅｓｔｅｄａｎｄｏｂｓｅｒ

6、ｖｅｄｕｎｄｅｒｔｈｅｐｈａｓｅｃｏｎｔｒａｓｔｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅｆｏｒｔｈｅａｌｔｅｒａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｉｒａｐｐｅａｒａｎｃｅ，ａｎｄｄｅｔｅｃｔｅｄｆｏｒｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｃｈａｎｇｅｓｏｆｍｕｓｃｌｅ-ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｇｅｎｅｓｂｙｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄｒｔ-ｐｃｒａｓｓａｙｓｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．【ｒｅｓｕｌｔｓ】（１）ｂｏｔｈ２０ｍｌ／ｌａｎｄ５０ｍｌ／ｌｈｏｒｓｅｓｅｒｕｍｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｗｅｒｅｃａｐａｂｌｅｏｆｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｍｙｏｔｕｂｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｃ２ｃ１２ｍｙｏｂｌａｓｔｓ，ｏｆｗｈｉｃｈｔｈｅ

7、２０ｍｌ／ｌｈｏｒｓｅｓｅｒｕｍｈａｄｔｈｅｈｉｇｈｅｒｉｎｄｕｃｉｎｇｅｆｆｅｃｔ（ｏｎｄａｙ７，ｔｈｅｒａｔｉｏｓｏｆｍｙｏｔｕｂｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｉｎｂｏｔｈｇｒｏｕｐｓａｒｅ３１．４％±２．１％ａｎｄ１９．０％±１．６％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｐ＜０．０００１）．（２）ｉｎｄｕｃｅｄｗｉｔｈ２０ｍｌ／ｌｈｏｒｓｅｓｅｒｕｍｆｏｒ３－４ｄａｙｓ，ｍｙｏｔｕｂｅｓｓｔａｒｔｅｄｔｏｆｏｒｍ．ｌａｔｅｒｏｎ，ｍｏｒｅａｎｄｍ