microrna-133诱导绵羊间充质干细胞分化为成肌细胞的研究

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1、ＢＢＷＫ＇＇．学校代码：１０２２５学号Ｉ５４４５；Ｓ＇；？■．＇＊－＞？＼学化冷文Ｍ－Ｂ３诱导绵羊间充叛干细胞分化为ｉｃｒｏＲＮＡ成肌细胞的研究宋维文指导教师姓名；安铁沫教授东北林业大学：申请学位级别：硕±学科专业发育生物学论文提交日期２０１５年４月论文答辩日期：２０１５年６月：授予学位单位；：东北林业大学授予学位日期答辩委员会主席：论文评阅人；、＃４义如乂學学校代码；１０２２５Ｓ１５４４学号：５学化冷文Ｍ－ｉｃｒｏＲＮＡ１３３诱导绵羊间充质干细胞分化为

2、成肌细胞的研究宋维文指导教师姓名；安铁诛教授东北林业大学；申请学位级别；硕击学科专业发育生物学０１５４２０１５年６月论文提交日期；２年月论文答辩日期：业大学授予学位曰期：授予学位单位：东北林答辩委员会主席；论文评阅人：东Ａ媒４欠會ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＣｏｄｅ；１０２２５ＲｅｇｉｓｔｅｒＣｏｄｅ：ＳＩ５４４５ＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅＤｅｇｒｅｅｏｆＭａｓｔｅｒＴｈｅＳｔｕｄｏｆ－ｙｍｉｃｒｏＲ１３３ｉｎｄｕｃｅｄｓｈｅ巧ｍｅ化ｎｃｈｙｍａｌｓｔ

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4、ｖｅｒｓｉｔｙｙ摘要已有研究证实－１３３，ｍｉ民在肌肉发育中起到非常重要的作用。间充质干细胞是具有－自我更新和多向分化潜能的细胞１３３。为了探明利用ｍｉＲ诱导绵羊化带和骨髓间充质干－细胞为成肌细胞的方法，本研究采用脂质体转染法将肌肉恃异表达的ｍ１３３ｉ艮转染到绵羊脫带，：、骨髓间充质干细胞后检测其诱导为成肌细胞的能力。其研究结果如下１．绵羊挤带、骨髓间充质干细胞的转染－ｍ－１－１３３ｍ采用阳离子脂质体转染法将ｉＲ３３ａ２表达载体或ｍｉＲｍｉｃｓ分ｉ别转染绵羊厮带间充质和骨髓间充质干细胞；２．转染细胞

5、培养与形态观察将上述转染细胞进行续培养，培养的第２８ｄ，在倒置巧光显微镜下细胞呈现梭形或纺链形当细胞约达到８０％汇合时，细胞由祸旋状生长变成定向有序的排列生长并且；，邻近细胞间出现融合倾向；３．转染细胞的鉴定１ＲＴ－ＰＣＲ检测采用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测上述细胞（）成肌细胞特异表达基因的ｑｑ骨骼肌特异基因ＭｙｏＤ、ＭｙｏＧ、Ｄｅｓｍｉｎ、Ｔｎｎ口、Ｍｙｆ５表法情况。在转染前未检测到ＭｙｏＤ和ＭｙｏＧ表达，转染后可Ｗ检测到ＭｙｏＤ和ＭｙｏＧ的表达；Ｄｅｓｍｉｎ、Ｔｎｎｉ２、Ｍｙ巧在转染后相对表达量增加。此外，与绵羊骨髓

6、间充质干细胞相比，绵羊脫带间充质干细胞在诱导后Ｄｅｓｍｉｎ、Ｔｎｎ口、Ｍｙｆ５相对表达量增加更多；２ＭＤ、Ｄ－（）成肌细胞特异表达基因的免疫炎光检测利用ｙｏｅｓｍｉｎ和ａａｃｔｉｎ相应抗体对转染细胞进行免疫巧光检测，其结果，与对照组（未转染细胞）在镜下未检测到相应基因发出巧光相比，４组转染细胞中，ＭｙｏＤ和Ｄｅｓｍｉｎ蛋白检测结果均呈现阳性，而ａ－ａｃｎ呈ｔｉ现阴性；－ｍ－（３）成肌细胞特异表达基因的流式细胞检测当将ｐｃＤＮＡ３．１ｉＲ１３３ａ２表达载体分别转染绵羊胶带和骨髓间充质干细胞后，采用流式细胞分析技术检测成

7、肌细胞特异蛋Ｄ、Ｄ－白Ｍｙｏｅｓｍｉｎ和ａａｃｔｉｎ，其结果，在绵羊麻带、骨髓间充质干细胞中，表达ＭｙｏＤ－的细胞量分别为１２，ｅｓｍｎ的细．．５．２％和２９．６％表达Ｄｉ９９３％和９９％ａ胞量分别为，表达－ａｃｔｉｎ０．９．的细胞量分别为１７％和９２４％当将ｍｉＲ１３３ｍｉｍｉｃｓ分别转染绵羊厮带和骨髓；间充质干细胞后，在送些细胞中检测到表达ＭｙｏＤ的细胞量分别为９９．３％和４３．７％，表－ｅｓｍｉｎ的细胞量分别为９９．０％和１００％ａａｃｔｉｎ．达Ｄ，表达的细胞量分别为１０７％和１．６８％；上述结果表明ｍｉ民－，

8、利用１３３成功诱导绵羊挤带间充质干细胞和绵羊骨髓间充质干细胞为成肌细胞一，本研究结果为进步探讨诱导间充质细胞为成肌细胞和骨骼肌细胞分化机制提供