体外诱导人脐带间充质干细胞分化为胰岛样细胞实验研究

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1、·804·堡迟渔Q生旦箜垫鲞箜塑!!!!堡靶!鱼!!竺!：丝!：!璺!竺Q-lZ体外诱导人脐带间充质干细胞分化为胰岛样细胞实验研究郝永蕾，朱旅云，王更银，李俊峡，赵芳，刘素蕊，杨少玲，李晓玲，王广宇[摘要]目的探索人脐带间充质干细胞(humanumbilicalcordmesenchymalstemcells，hUC—MSCs)在胰岛细胞微环境中向胰岛样细胞的分化潜能及功能变化趋势。方法将分离的第3代hUC—MSCs用低糖达尔伯克必需基本培养基(L—DMEM)重悬，接种单纯培养组及与大鼠胰岛细胞共培养组(共培养组)。倒置显微镜观察hUC—MSCs的形态变化；流式细胞仪鉴定其细胞表面标志；

2、免疫细胞化学鉴定胰十二指肠同源框一1基因(PDX—1)的表达；放免法检测hUC—MSCs胰岛素和C肽的分泌及对糖刺激的反应。结果hUC—MSCs呈均一纺锤形平行排列或漩涡状排列生长，不表达CD34、CD45和CD14，高表达CD29、CD44和CD105；共培养组诱导后3d及7d经细胞逐渐变圆并聚集成团，PDX-1呈阳性表达，至10d及14dPDX一1阳性细胞罕见。单纯培养组细胞形态未发生变化，PDX一1表达阴性。共培养组培养上清中检测到较高水平的胰岛素及c肽，单纯培养组检测到少量的胰岛素，检测不到c肽，两组培养3、7、1O和14d的胰岛素分泌水平比较差异均有统计学意义(P<0．01)。

3、共培养组胰岛素及c肽水平以7d最高，10d次之，与3d和14d比较差异均有统计学意义(P<0．01)，共培养组糖刺激指数为1．41。结论hUC—MSCs在胰岛细胞微环境中具有向胰岛样细胞分化的潜能，其内分泌功能随体外诱导时间的延长呈现先递增后递减的趋势。[关键词]人；脐带；间质干细胞；细胞分化；细胞，胰岛样；大鼠[中国图书资料分类号]R33—33[文献标志码]A[文章编号]1002-3429(2010)09-0804-04’IIheStudyofHamanUmbilicalCordMesenchymalStemCelIsDiferentiatedintoIslet-likeCellsin

4、VitroHAOYong—lei，ZHULv—yun，WANGGeng—yin，LIJun—xia，ZHAOFang，LIUSu—rui，YANGShao—ling，LIXiao·ling，WANGGuang—yu(BethuneInternationalPeaceHospitalofPLAa．DepartmentofEndocrinology，b．DepartmentofBloodTransfusion，c．DepartmentofCardiology，Shijiazhuang050082，China)[Abstract]objectiveToinvestigatethediffere

5、ntiationpotentialandfunctionaltrendsofhUC—MSCsintoislet—likecellsinratisletcellsmicroenvironment．MethodsThe3rdgenerationofhUC·MSCswasresuspendedwithL—DMEM，andinoculatedintothesimpleculturegroupandco—culturegroup(co—culturedwithratislets)．Invertmicroscopewasusedtoin—vestigatethemorphologicchangeso

6、fthecells；cellsurfacemarkerwasdeterminedbyflowcytometry；theexpressionofpan—creaticduodenalhomeoboxgene(PDX一1)wasidentifiedbyimmunocytochemistry；thesecretionlevelofinsulinandC—pep—tideweredetectedbyradioimmunoassayandtheresponseofislet—likecellsstimulatedbyglucosewasobserved．ResultshUC·MSCswasfusi

7、formandgrownasparallelismandswirling，theydidnotexpressCD34，CD45orCDI4，buthighlyex—pressedCD29．CD44andCD105．TheinducedceilswithpositiveexpressionofPDX一1inco—culturegroupmorphologicallybecameroundandweregatheringintoamas