宽叶缬草醚酯提取物体外抗氧化活性研究论文

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1、宽叶缬草醚酯提取物体外抗氧化活性研究论文黄凌，黎继烈，杨杰，崔培梧，文蓉【摘要】目的探讨缬草醚酯提取物体外抗氧化活性。方法采用DPPH法、邻苯三酚自氧化法、水杨酸法，分别测定缬草醚酯提取物清除DPPH自由基、超氧阴离子自由基和羟自由基的能力。结果样品中活性物质对于DPPH自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基等自由基半清除率浓度(IC50)分别为1.36，1.46和2.14mg/ml。结论在实验条件下，缬草醚酯提取物对DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子有较好的抑制作用。【关键词】宽叶缬草;自由基;抗氧化活性Abstract：ObjectiveTostudytheantioxidantact

2、ivityinvitroofetherandgreaseextractfromValerianaoffeinalisL.MethodsThemethodsofDPPH,pyrograllolauto-oxidationandsalicyliclacidethanolextractofValerianaoffeinalisL.ResultsThehalfmaximalinhibitoryconcentration(IC50)ofsampleonDPPH·,O2-·andOH·g/ml.ConclusionTheextracthasgoodscavengingeffectonDPPH·,OH

3、·andO2-·undertheconditionofexperiment.Keyl蒸馏水于高速捣碎机中粉碎后移入1000ml三角瓶中超声处理20min。加入300ml乙醚、醋酸乙酯混合液(1∶1)于三角瓶中，于25℃下振荡萃取2h(密封)。抽出上层混合液，真空浓缩至膏状取出，冷冻干燥。所得膏状物用无水乙醇复溶于50ml容量瓶制成20.0mg/ml样品溶液，于4℃温度下保存备用。1.2仪器UV-1700型紫外分光光度仪(日本岛津上海有限公司);R201D-Ⅱ型旋转蒸发仪(郑州长城科工贸有限公司);JJ-2B型电动高速捣碎机(江苏荣华仪器制造有限公司);AS2060B型超声清洗器;FD-1

4、A型冷冻干燥机(北京博医实验仪器公司)。1.3试剂1，1-二苯基苦基苯肼(DPPH)(Sigma公司);抗坏血酸、茶多酚、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、邻苯三酚、水杨酸、硫酸亚铁、无水乙醇、乙醚、醋酸乙酯、浓盐酸、双氧水(30%)等均为国产分析纯。2方法2.1缬草醚酯提取物清除DPPH·自由基能力测定DPPH自由基清除实验参照彭长连等5方法，并依据缬草提取物成分特性对具体操作做出改动。DPPH溶液的配制：准确称取19.70mgDPPH用无水乙醇溶解并定容于250ml容量瓶中，DPPH浓度为2.0×10-4mo1/L，避光保存(0～4℃)。取样品溶液2.0ml稀释10倍后移入25ml三角瓶

5、中。分别移取200，400，600，800，1000μl稀释液于试管中，用无水乙醇补足到2.0ml后编号。每支试管各加入2.0×10-4mol/LDPPH溶液2.0ml均匀混合，在28℃下避光静置30min。以无水乙醇调零，于λ516测定其吸光度A。空白对照组采用无水乙醇替代DPPH溶液，其他试剂与样品组相同。各组实验组均做3次平行，取均值。DPPH·自由基清除率按下式计算。清除率(%)=A0-(A1-A1')A0×100%式中：A0——2.0ml乙醇加2.0mlDPPH溶液的吸光度;A1——2.0ml样品溶液加2.0mlDPPH溶液的吸光度;A1'——2.0ml样品溶液加2.0ml乙醇

6、的吸光度。2.2缬草醚酯提取物清除羟基自由基(OH·)能力的测定利用Fenton反应法产生OH·，OH·与水杨酸反应产生有色物质，该产物在λ510有强吸收峰。若体系中加入清除OH·的物质，则会减少有色物质生成，吸光度降低6,7。具体操作为：取样品溶液2.0ml稀释10倍后移入25ml三角瓶中。分别移取400,600,800,1000,1200μl稀释液于试管中，用无水乙醇补足到2.0ml后编号。每支试管各加入1.0×10-2mol/LFeSO4l.0ml，1.0×10-2mol/L水杨酸-乙醇溶液2.0ml，最后加入30%H2O22.0ml启动反应，于室温下反应1h。以蒸馏水调零，测λ5

7、10样品的吸光度。考虑到试剂与提取物溶液的协同增色效应，以蒸馏水2.0ml替代30%H2O22.0ml，其他试剂与样品组相同。各组实验组均做3次平行，取均值。羟基自由基的清除率按下式计算。清除率(%)=A0-(A1-A1')A0×100%式中：A0——以无水乙醇代替样品液的吸光度;A1——样品组的吸光度;A1′——蒸馏水代替H2O2的空白对照组吸光度。2.3缬草醚酯提取物清除超氧阴离子自由基(O2-·)能力的测定采用邻苯三酚氧化法8