中药止哮平喘方抗哮喘豚鼠模型气道炎症的实验研究

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1、中药止哮平喘方抗哮喘豚鼠模型气道炎症的实验研究：胡作为，周电光，周燕萍，王鹏【关键词】止哮平喘方　　　　摘要：【目的】探讨中药止哮平喘方(主要由法半夏、瓜蒌皮、薤白、白芍、柴胡、黄芩、麻黄、枳壳、射干、甘草等中药组成)对哮喘豚鼠模型气道炎症的影响。【方法】复制卵蛋白致敏哮喘模型，观察支气管及肺的病理学改变；测量全血及肺泡灌洗液(BALF)中血细胞计数；免疫组织化学法测定外周血单核细胞(PBMC)中CD＋４、CD＋８T细胞的含量。【结果】病理研究显示哮喘模型组豚鼠气道周围大量炎性细胞浸润，以嗜酸性粒细胞(EOS)和淋巴细胞为主。哮喘模型组全血及BALF中炎性细胞数显著高

2、于正常组(Ｐ＜001)；中药大剂量组和西药对照组炎性细胞数均显著降低(Ｐ＜005或Ｐ＜001)。哮喘模型组CD＋４T细胞高于正常组(Ｐ＜005)；中药大剂量组和西药对照组CD＋４T细胞均有下降(与哮喘模型组比较，Ｐ＜005)。【结论】中药止哮平喘方能降低气道及外周血炎性细胞的数量，具有抗气道炎症的作用；降低CD＋４细胞数量，相对增加CD＋8T细胞，使CD＋4/CD＋8恢复正常状态，从而起到调节其紊乱的免疫功能状态的作用，这可能是止哮平喘方抗气道炎症的作用机理之一。　　关键词：止哮平喘方/药理学；哮喘/病理学；哮喘/免疫学；嗜酸性细胞；CD4阳性T淋巴细胞；CD8阳性T

3、淋巴细胞；瓜蒌薤白半夏汤/药理学；小柴胡汤/药理学；芍药甘草汤/药理学　　支气管哮喘是以嗜酸细胞、淋巴细胞等浸润为主的气道慢性变态反应性炎症，其中淋巴细胞尤其是T淋巴细胞活化起关键作用。现代医学对哮喘的治疗仍然首选糖皮质激素全身或局部用药，但长期应用副作用明显。中药止哮平喘方是王鹏教授多年诊治支气管哮喘的经验方，有宽胸理气、通阳散结、化痰解痉等作用，临床疗效确切。为探讨支气管哮喘气道炎症的病理学特征和止哮平喘方抗气道炎症的作用机制，本实验采用全血及肺泡灌洗液(BALF)中细胞学分析及免疫组织化学方法，评价中药止哮平喘方对哮喘气道炎症的影响及对TH1/TH2型细胞的作用

4、。　　1材料与方法　　11主要试剂及仪器　　卵蛋白由Sigma公司出品(进口分装)；016mol/L戊巴比妥钠；肝素用生理盐水配制成1250U/mL的溶液；小鼠抗大鼠SABC试剂盒(即用型)、鼠抗CD＋4及CD＋8多克隆抗体、DAB显色试剂盒均为武汉博士德生物工程公司产品；402超声雾化器，上海四菱医疗机械厂生产。　　12实验动物及分组　　清洁级健康豚鼠，体重(200±20)g，由同济医科大学医学动物中心提供。检疫1周后，豚鼠随机分为①正常对照组、②哮喘模型组、③西药对照组、④中药小剂量组、⑤中药大剂量组，共5组，每组10只(雌雄分笼饲养)。　　13造模方法　　以卵蛋

5、白致敏和攻击加以复制。实验第1天，配制100g/L卵蛋白生理盐水，豚鼠腹腔注射1mL以致敏；第15天将致敏豚鼠置于14L透明玻璃钟罩内，给予10g/L卵蛋白生理盐水超声雾化吸入(雾化量由小到大)15～20s，后自然吸入15～20s，出现呼吸频率加快、点头呼吸、咳嗽、抽搐等症状时为引喘成功。以后每隔1天以10g/L卵蛋白生理盐水诱喘。按最大雾量，自然吸入15～30s，使哮喘反复发作(每次诱喘之前，每只豚鼠均腹腔注射苯海拉明5mg/kg)。共4次。正常对照组以等量生理盐水进行腹腔注射和雾化，方法同上。　　14药物制备及给药方法　　止哮平喘方(由法半夏10g、瓜蒌皮10g、

6、薤白10g、白芍30g、柴胡10g、黄芩10g、麻黄10g、枳壳10g、甘草10g和射干10g组成)由湖北中医学院中药室制备(水煮醇沉法)，含生药2g/mL；地塞米松片，075mg/片，在第1次诱喘24h后，即从第16天开始按1mg・kg－１胃饲给药；中药小剂量组止哮平喘方6g・kg－１；中药大剂量组止哮平喘方24g・kg－１；哮喘模型组及正常对照组均饲以等容量生理盐水。共治疗8d。　　15标本采集及检测　　151标本采集　　称体重，016mol/L戊巴比妥钠1mL/kg腹腔内注射，麻醉。常规消毒，心脏采血，肝素抗凝，血细胞计

7、数测定细胞总数，涂片、染色，作细胞学分析。摘取豚鼠肺脏，用无尖针头注射器置于气管分叉处，缓慢注入生理盐水(37℃)2mL，保留30s后抽出，重复4次。每例收集肺泡灌洗液6～7mL(回收率＞85%)，-4℃储存，1h内作细胞分离。BALF于1500r/min离心10min，沉淀细胞用1mLHanks液重悬。取01mL测定细胞总数；取02mL涂片，C)的制备和激活　　称体重，016mol/L戊巴比妥钠1mL/kg麻醉豚鼠。常规消毒，心脏采血，抗凝。用淋巴细胞分层液分离淋巴细胞，用完全RPMI1640定容细胞并记数。台盼蓝染液检查PBMC活性，活性超过95