冷哮丸对哮喘豚鼠模型作用机制的实验的研究

《冷哮丸对哮喘豚鼠模型作用机制的实验的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、2．1．4主要仪器：JSC-OK双头式多功能型超声波雾化器；RJE压力换能器；LMS-2B型二道生理记录仪；DH一140型动物人工呼吸机；ThermoLabsystemsMultiskanMK，酶标分析仪；722型光栅分光光度计；OlympusBX50F-3双显微镜(含自动照相装置NikonE990)；VEX380型一80"(2低温冰箱。2．2方法2．2．1动物模型复制以卵蛋白致敏和攻击复制豚鼠哮喘模型。实验第1天，配制lOOg／L卵蛋白生理盐水，豚鼠腹腔注射lml卵蛋白生理盐水以致敏；第15天将致敏豚鼠置于15升透明玻璃罩

2、内，给予1％卵蛋白生理盐水雾化吸入。以后每隔24h以1％卵蛋白生理盐水诱喘，共4次。正常对照组用同样方法以等量生理盐水进行腹腔注射及雾化吸入。2．2．2动物分组将豚鼠随机分为6组：①正常对照组，②哮喘模型组，③西药对照组(地塞米松治疗组)，④冷哮丸大剂量组，⑤冷哮丸中剂量组，⑥冷哮丸小剂量组，每组1o只。2．2．3实验检测项目2．2．3．1实验一冷哮丸对哮喘豚鼠气道反应性的影响。①一般情况观察：包括各组豚鼠的行为、饮食、体重、排便、皮毛及死亡等情况。②乙酰胆碱(Ach)支气管激发试验：于第23d治疗结束后2h，用3％戊巴比妥

3、钠30mg／kg腹腔注射麻醉，仰面固定于木板上，切开颈部皮肤暴露颈静脉及气管，用静脉留置针行颈外静脉穿刺置管，行气管切开、气管插管，连DH-140型动物人工呼吸机行辅助通气。每只豚鼠分别给予成倍增加的乙酰胆碱(o、12．5、25、50、100、200pg／kg)，每次进液量200“l，两个相邻给药点间隔5min。采用hniRes2003动物肺功能分析系统连续动态测定呼气阻力(expiratoryresistance，Re)，计算各给药时间点的Re与基础的Re比值(以百分数表示)，以Re的变化代表气道反应性。③组织胺气道反应性

4、测定：豚鼠麻醉后，纵向剪开颈部皮肤及皮下组织，暴露气管，取中段气管软骨环，剪开形成3mm宽的气管螺旋条。用细线将螺旋条一端固定于浴槽底部，另一端连与压力换能器。对螺旋条施以2g的起始张力，平衡1h后，间隔2-3rain依次加入10。6-10。3mol／L的组织胺进行刺激，连续记录气管螺旋条的张力变化。2．2．3．2实验二冷哮丸对哮喘豚鼠外周血和BALF中EOS数量及肺组织形态学的影响。于第23d麻醉动物，分离颈动脉，取颈动脉血lml作白细胞分类和EOS计数。其余全血离心，取血清，放置一20"C低温冰箱中保存待检。对采血后的豚

5、鼠进行肺泡灌洗，并回收肺泡灌洗液(BALF)，瑞氏染色后行EOS计数，肉眼及光镜观察豚鼠肺组织形态学变化。2．2．3．3实验三、四、五冷哮丸对哮喘豚鼠血清总IgE、血清和BALF中No、IL一4、IL一5、ET-1的影响。按豚鼠IgE、NO、IL-4、IL-5、ET-1等相关试剂盒说明进行操作测定。2．3统计学方法数据均以；4-s表示，采用SPSSl7．0统计软件进行数据处理，组间数据比较采用方差分析，尸<0．05为差异有统计学意义。3结果3．1实验一：冷哮丸对哮喘豚鼠气道反应性的影响3．1．1一般情况结果：正常对照组豚鼠无

6、任何不适反应，平均体重增加，毛色光泽。哮喘模型组豚鼠普遍精神较差，活动减少，反应迟钝，进食及饮水量明显下降，毛色失去光泽，出现不同程度的呼吸次数增加，张口等呼吸困难症状，在整个喂养过程中体重增加不明显。哮喘模型组1只豚鼠哮喘严重发作经抢救无效死亡。各用药组豚鼠情况均较哮喘模型组明显改些音。3．1．2各组豚鼠在不同浓度Ach激发后Re增长率比较：在Ach浓度为50ug／kg、100“g／kg、200ug／kg时，哮喘模型组Re的增长率与正常对照组比较，差异有显著统计学意义(尸<0．01)。在hch浓度为50“g／kg、100“

7、g／kg、200“g／kg时，地塞米松治疗组、冷哮丸大、中、小剂量组与哮喘模型组Re的增长率比较，差异有统计学意义(尸<0．05或尸o．05)。3．1．3各组豚鼠气管螺旋条对组织胺的反应性比较：当浴槽中组织胺浓度达到1o。5-10-3t001／L时，各组豚鼠气管螺旋条产生剂量依赖性收缩。哮喘模型组豚鼠气管螺旋条张力明显高于正常对照组(尸

8、的反应性均降低，各个浓度组织胺所诱导的气管螺旋条收缩张力与正常组类似(尸>0．05)。3．2实验二冷哮丸对哮喘豚鼠外周血和BALF中EOS数量及肺组织形态学的影响3．2．1冷哮丸对豚鼠血及BALF中EOS计数的影响各组豚鼠血及BALF中EOS计数结果表明：正常对照组豚鼠血及BALF中白细包