直肠癌患者外周血单核细胞诱导为树突细胞的论文

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1、直肠癌患者外周血单核细胞诱导为树突细胞的论文直肠癌患者外周血单核细胞诱导为树突细胞【关键词】直肠癌;单核细胞;树突细胞;免疫治疗【摘要】目的用直肠癌患者外周血单核细胞通过体外培养的方法诱导为成熟树突细胞。方法cs3000血细胞分离机采集直肠癌患者外周血单核细胞悬液，ficoll分离单个核细胞，用含10%fbs的rpmi1640培养基培养，第0天加入gmcsf1000u/ml、il4500u/ml，第4天2/3量换液，补足gmcsf、白介素(il)4，并加入肿瘤坏死因子(tnf)α500u/ml诱导其成熟，以后每隔3天2/3量换液。结果培养

2、至第11天，收集培养的1×105～2×105个树突细胞经流式细胞仪检测表达cd83+(52.9±5.8)%，cd86+(79.2±8.1)%，hladr(65.8±5.7)%，cd1a(51.3±6.4)%，及cd+14(4.72±2.16)%。结论直肠癌患者外周血单核细胞经gmcsf、il4及tnfα联合培养能诱导出成熟树突细胞。为直肠癌的免疫治疗提供了临床应用基础。【关键词】直肠癌;单核细胞;树突细胞;免疫治疗　【abstract】objectivetoinducetheperipheralbloodmononuclearcells(pbm

3、cs)fromrectalcancerpatientsintodendriticcellsinvitro.methodspbmcsofpatientsentmachine,abstractedbyficoll,culturedinrpmi1640nutritivemediumcontaining10%fbs,inducedbyaddinggmcsf1000u/ml,il4500u/mlonthe1stday,and2/3volumeoffluidcsfandil4entedandtnfα500u/mlotematureonthe4thday

4、,andthereafter2/3volumeofexchangefluidevery3days.results1×105～2×105dendriticcellscsfromrectalcancerpatientscaninducedintodendriticcellsbygmcsf,il4andtnfα,andmunotherapyofrectalcancer.　　【keyc;dendriticcell;immunotherapy　　直肠癌是胃肠道中常见的恶性肿瘤，其发病率仅次于胃癌和食道癌，是大肠癌的最常见部位。.直肠癌的治疗通常采用直肠系膜

5、的整体切除结合放射治疗，但是复发率高，严重影响患者的生活质量。近年来随着肿瘤免疫学和细胞生物学的发展，以树突细胞(dc)为基础的抗肿瘤免疫治疗成为当前直肠癌治疗研究的热点〔1〕。dc是体内功能最强的抗原提呈细胞(apc)，是启动、调控、维持免疫应答的中心环节，在诱导特异性抗肿瘤细胞免疫中起着关键作用。本研究通过对直肠癌患者外周血单核细胞通过加入多种细胞因子诱导培养为成熟dc，为直肠癌的生物免疫治疗提供临床基础。　　1材料与方法　　1.1主要实验材料　　淋巴细胞分离液(天津川页公司)，rpmi1640培养基(美国gibco公司)，胎牛血清(fbs，天津灏

6、洋公司)，重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhgmcsf，厦门特宝公司)，重组人白细胞介素4(rhil4)，肿瘤坏死因子α(tnfα，上海欣百诺公司)，流式细胞仪(美国bectondickinson公司)，cs3000血细胞分离机(美国百特公司)，co2培养箱(美国shellab)。　　1.2实验样本　　通过cs3000血细胞分离机采集直肠癌患者3000ml循环量的外周血单核细胞悬液约60ml左右。　　1.3实验方法　　取收集的单核细胞悬液用含15u/ml肝素的生理盐水稀释，2500r/min离心15min，去上清，沉淀用生理盐水1∶6稀

7、释，200目筛网过滤，将稀释液小心平铺到淋巴细胞分离液上层。2000r/min离心20min，吸取单核细胞层，生理盐水洗涤3次，去上清，以rpmi1640培养基重悬，200目筛网过滤，平分至6个75cm2的培养瓶中，37℃、5%co2培养箱中贴壁30min，轻轻晃动培养瓶，吸除悬浮细胞，生理盐水轻轻洗涤1次，加入含gmcsf1000u/ml、il4500u/ml、10%fbs的rpmi1640培养基25ml，继续培养，并记为第0天，第4天2/3量换液，补足gmcsf、il4，并加入tnfα500u/ml，诱导dc成熟，以后每隔3d2/3量换

8、液，补足细胞因子。培养至第11天，用细胞刮刀轻轻刮下贴壁细胞，生理盐水1000r/min离心1