外周血单核细胞诱导的cd123+髓系树突状细胞的特性研究

《外周血单核细胞诱导的cd123+髓系树突状细胞的特性研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、外周血单核细胞诱导的CD123+髓系树突状细胞的特性研究：石军,王敏,万云,池田和真【摘要】　　目的:探讨体外髓系培养体系中外周血单核细胞的CD123+髓系树突状细胞（mDC）的生物学特性。方法:分离健康人外周血单核细胞,用重组的粒/单核细胞集落刺激因子（GMCSF）和白细胞介素4（IL4）将其诱导为树突状细胞（DC）。用流式细胞术（FCM）检测DC表面共刺激分子、CD304、CD123和CD11C的表达,并用间接免疫磁珠法将其中CD123+DC加以分离纯化;激光共聚焦显微镜、扫描电镜观察CD123+DC形态;ELISA法检测CD123+DC的IL12

2、分泌量;葡聚糖吞噬试验和3HTdR渗入法分别检测CD123+DC的吞噬功能和对同种异体T细胞的刺激能力。结果:外周血单核细胞经GMCSF和IL4诱导7d后,细胞表面高度表达CD86和CD11C,中等量表达CD1a和CD123,低表达CD83,丧失CD14的表达,其中,CD123和CD11C均匀分布于DC表面。免疫磁珠纯化后的CD123+DC呈现典型的不成熟DC形态,除细胞体积较小外,其表面突起类似于CD123-DC。CD123+DC仅微量分泌IL12,其吞噬能力强于CD123-DC（P<0.05）,但抗原刺激功能低于后者（P<0.05）。

3、结论:GMCSF和IL4培养体系中的CD123+DC可能是DC分化发育过程中更早期的未成熟mDC,具有独特的生物学特性。【关键词】髓系培养体系;髓系树突状细胞;CD123　　［Abstract］AIM:ToinvestigatethebiologicalcharacteristicsofCD123+DCderivedfromcordbloodmonocytesinmyeloidculturesystem.METHODS:Themonocytesisolatedfromperipheralbloodetery.CD123+DCagiccellsorting

4、separationtechnique.ThemorphologicalpropertiesofCD123+DCicroscopeandscanelectronmicroscope.TheconcentrationofIL12secretedbyDCixedTlymphocytereaction(MLR).RESULTS:FACSanalysisshooderateexpressionofCD1aandCD123,loorphologyofimmatureDCilarshortcytoplasmicprojectionsasCD123-DC.CD123+D

5、CsecretedlooresignificantendocytosisandlessantigenpresentationfunctionthanthatofCD123-DC（P<0.05）.CONCLUSION:CD123+DCinducedightbemoreearlyphaseofimmaturemyeloidDCalongyeloidculturedsystem;myeloiddendriticcell;CD123　　树突状细胞（dendriticcell,DC）是功能强大的专职抗原提呈细胞,将体外培养的DC回输到患者体内,以激发机体产生明确

6、的抗肿瘤免疫应答,已成为有效的临床抗肿瘤治疗手段之一。根据其表面标记,DC分为髓系DC（myeloidDC,mDC)和浆细胞样DC（plasmacytoidDC,pDC）两个大的亚群,前者主要用于抗肿瘤免疫治疗,后者主要参与免疫耐受［1］。DC是个非均质性的群体,最近,在体外诱导的mDC表面发现淋巴系DC特异性标记CD123的高度表达,但这群兼具髓系和淋巴系标记的DC是否为一个特殊的亚群尚未见报道。我们将外周血单核细胞诱导的髓系CD123+DC加以分离纯化,结合细胞形态、表面标记和对T细胞的刺激功能对其生物学特性进行研究。　　1材料和方法　　1.1材料　

7、　采集健康自愿者外周血50mL,肝素抗凝。白细胞介素4（rebinanthumaninterleukin4,rhIL4）由日本盐野制药公司惠赠。重组人粒/单核细胞集落刺激因子（rebinanthumanGranulocytemacrophagecolonystimulatingfactor,rhGMCSF）购自美国RHC公司。FITC、APC或PE标记的鼠抗人单克隆抗体(mAb）购自美国PharMingen公司。鼠抗人CD14、CD4及PE的免疫磁珠购自德国MiltenyiBiotec公司。FITCdextran(Mt40×103)及IL12

8、免疫酶联吸附测定（ELISA）试剂盒分别购自美国Si