散发性结直肠癌hmlh1蛋白表达的研究

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1、散发性结直肠癌hMLH1蛋白表达的研究［摘要］目的：通过测定错配修复基因hMLH1在散发性结直肠癌(CRC)组织中的蛋白表达变化，分析其在散发性CRC发生机制中所起的作用，并评估其可能的临床意义。方法：采用PV-6000二步法免疫组化检测技术对60例散发性CRC石蜡切片进行hMLH1表达的检测。结果：60例散发性CRChMLH1缺失表达11例(18.3%，11/60)，hMLH1缺失表达与患者年龄、肿瘤部位、组织学类型和分化程度密切相关(P＜0.05或P＜0.01)，而与患者性别、肿瘤大体类型、肿块大小、浸润深度、淋巴结及

2、远处转移与否和患者的Dukes分期均无显著相关性(P＞0.05)。结论：一定比例的散发性CRC中存在MMR基因的缺陷，并具有相对特殊的临床病理特征。　　［关键词］结直肠肿瘤；错配修复基因；hMLH1基因；免疫组织化学　　ResearchonExpressionofhMLH1InSporadicColorectalCarcinoma　　Abstract：ObjectiveToanalysetheroleofhMLH1inthecarcinogenesisofsporadiccolorectalcarcinomaandtoev

3、aluateitspossibleclinicalsignificance,LH1insporadiccolorectalcarcinoma.MethodsTheexpressionofmismatchrepairgenehMLH1in60casesofsporadiccolorectalcarcinomamunohistochemicalmethod.ResultsLossofhMLH1expressiona.LossofhMLH1expressiondidnotcorrelateorgrosstype,tumorsiz

4、e,invasivedepth,lymphnodemetastasis,distantmetastasisandDukesstage(P＞0.05),butorlocation,histologicaltypeandhistologicalgrade(P＜0.05orP＜0.01).ConclusionThereadisplayingMMRdefective,a;Mismatchrepairgene;hMLH1gene;Immunohistochemistry　　结直肠癌(colorectalcarcinoma，CRC)是

5、我国常见的恶性肿瘤之一，随着医学生物技术以及分子生物学的飞速发展，人们已认识到CRC的发生发展并不遵循单一的途径［1］。本研究旨在用免疫组化方法检测错配修复基因hMLH1在散发性CRC组织的蛋白表达状况，分析其与临床病理学参数之间的关系，探讨hMLH1基因在散发性CRC发病机制中所起的作用，为指导临床实践提供可靠的理论依据。　　1材料和方法　　1.1病例选择与临床资料收集青岛大学医学院附属医院2004年1月至2006年5月临床资料完整的散发性CRC常规石蜡包埋组织标本60例，其中男性38例，女性22例。年龄30岁~88岁，

6、平均年龄(55.65±11.36)岁。所有标本切片均经两位资深病理医师确诊，不包括遗传性非息肉病性大肠癌(hereditarynonpolyposiscolorectalcancer，HNPCC)患者，所有病例手术前均无系统的放疗和化疗病史。　　1.2免疫组织化学检测方法　　1.2.1主要试剂和工作浓度兔抗人hMLH1多克隆抗体购自美国SantaCruz公司，工作浓度分别为1∶50。PV6000二步法免疫组化检测试剂购自美国Zymed公司。　　1.2.2实验方法取存档蜡块厚3μｍ连续切片，二甲苯脱蜡、梯度乙醇水化后置于新

7、鲜配制的3%H2O2去离子水室温孵育10min，然后蒸馏水冲洗。将切片放入盛有1mM　EDTA(pH8.0，1∶50)抗原修复液的容器中，置微波炉内进行微波修复，室温下冷却，PBS(磷酸盐缓冲液)洗涤。滴加一抗，室温下孵育3h。PBS洗涤，滴加PV6000二抗，置于37℃电热恒温水箱孵育20min，PBS洗涤，切片在0.04%DAB(二氨基联苯胺盐酸盐)+1%H2O2中显色，见棕黄色颗粒后终止反应。苏木精复染，盐酸酒精分化，氨水反兰。常规脱水，二甲苯透明，中性树脂封片。用PBS取代一抗作阴性对照。　　1.3结果判断标准所

8、有切片均由两位病理科资深专家阅片。每张切片选择有代表性区域，并避开切片的周边区域，光镜下随机观察10个高倍镜视野，记录10×100个阳性细胞的百分比。阳性结果参照Friedrichs等［2］的免疫组化评判标准，分别观察染色强度和阳性细胞所占的百分数，先按染色强度计分(染色深浅需与背景着色相对比)，0分为