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时间:2018-09-05
《散发性结直肠癌hMLH1蛋白表达的研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、散发性结直肠癌hMLH1蛋白表达的研究[摘要]目的:通过测定错配修复基因hMLH1在散发性结直肠癌(CRC)组织中的蛋白表达变化,分析其在散发性CRC发生机制中所起的作用,并评估其可能的临床意义。方法:采用PV-6000二步法免疫组化检测技术对60例散发性CRC石蜡切片进行hMLH1表达的检测。结果:60例散发性CRChMLH1缺失表达11例(%,11/60),hMLH1缺失表达与患者年龄、肿瘤部位、组织学类型和分化程度密切相关(P<或P<),而与患者性别、肿瘤大体类型、肿块大小、浸润深度、淋巴结及远处转移与否和患者的D
2、ukes分期均无显著相关性(P>)。结论:一定比例的散发性CRC中存在MMR基因的缺陷,并具有相对特殊的临床病理特征。[关键词]结直肠肿瘤;错配修复基因;hMLH1基因;免疫组织化学ResearchonExpressionofhMLH1InSporadicColorectalCarcinoma Abstract:ObjectiveToanalysetheroleofhMLH1inthecarcinogenesisofsporadiccolorectalcarcinomaandtoevaluateitspossiblec
3、linicalsignificance,WedeterminedtheexpressionofmismatchrepairgenehMLH1insporadiccolorectalcarcinoma.MethodsTheexpressionofmismatchrepairgenehMLH1in0casesofsporadiccolorectalcarcinomawereanalyzedusingPV6000immunohistochemicalmethod.ResultsLossofhMLH1expressionwer
4、efoundin11cases(11/60,%)sporadiccolorectalcarcinoma.LossofhMLH1expressiondidnotcorrelatewithpatient'sgender,tumorgrosstype,tumorsize,invasivedepth,lymphnodemetastasis,distantmetastasisandDukesstage(P>),butwascloselyrelatedtopatient'sage,tumorlocation,histological
5、typeandhistologicalgrade(P<P<).ConclusionTherewasasubsetofsporadiccolorectalcarcinomadisplayingMMRdefective,withspeciallyclinicalandpathologicalfeatures.KeyWords:Colorectalcarcinoma;Mismatchrepairgene;hMLH1gene;Immunohistochemistry 结直肠癌(colorectalcarcinoma,CRC)是
6、我国常见的恶性肿瘤之一,随着医学生物技术以及分子生物学的飞速发展,人们已认识到CRC的发生发展并不遵循单一的途径[1]。本研究旨在用免疫组化方法检测错配修复基因hMLH1在散发性CRC组织的蛋白表达状况,分析其与临床病理学参数之间的关系,探讨hMLH1基因在散发性CRC发病机制中所起的作用,为指导临床实践提供可靠的理论依据。1材料和方法病例选择与临床资料收集青岛大学医学院附属医院004年1月至XX年5月临床资料完整的散发性CRC常规石蜡包埋组织标本60例,其中男性38例,女性22例。年龄30岁~88岁,平均年龄(±)岁。
7、所有标本切片均经两位资深病理医师确诊,不包括遗传性非息肉病性大肠癌(hereditarynonpolyposiscolorectalcancer,HNPCC)患者,所有病例手术前均无系统的放疗和化疗病史。免疫组织化学检测方法主要试剂和工作浓度兔抗人hMLH1多克隆抗体购自美国SantaCruz公司,工作浓度分别为1∶50。PV6000二步法免疫组化检测试剂购自美国Zymed公司。实验方法取存档蜡块厚μm连续切片,二甲苯脱蜡、梯度乙醇水化后置于新鲜配制的3%H2O2去离子水室温孵育10min,然后蒸馏水冲洗。将切片放入盛
8、有1mM EDTA(,1∶50)抗原修复液的容器中,置微波炉内进行微波修复,室温下冷却,PBS(磷酸盐缓冲液)洗涤。滴加一抗,室温下孵育h。PBS洗涤,滴加PV6000二抗,置于3℃电热恒温水箱孵育20min,PBS洗涤,切片在%DAB(二氨基联苯胺盐酸盐)+1%H2O2中显色,见棕黄色颗粒后终止反应。苏木精复染,
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