脑缺血再灌注后大鼠igf1及其受体表达对其神经行为的影响

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1、脑缺血再灌注后大鼠IGF1及其受体表达对其神经行为的影响：孙锋刘蔚丁晓洁王超郭云良【摘要】　　目的观察脑缺血再灌注后大鼠胰岛素生长因子1(IGF1)及其受体（IGF1R）表达对其神经行为的影响。方法成年健康雄性CAO/R）模型。应用BEDERSON评分法评价脑缺血再灌注后神经行为功能，免疫组织化学技术检测IGF1和IGF1R表达。结果脑缺血再灌注后各组动物均出现不同程度的神经功能受损，从再灌注3d开始神经功能逐渐恢复，但至再灌注7d才有显著性差异。免疫组化检测显示，脑缺血再灌注后脑组织IGF1和IGF1R表达区域和时相变化规律基本一致，再灌注12h～7d持

2、续高表达，1～3d达高峰。结论脑缺血再灌注后IGF1和IGF1R的早期表达可能对神经功能恢复有一定的促进作用。【关键词】脑缺血神经行为功能胰岛素生长因子1胰岛素生长因子1受体　　［ABSTRACT］ObjectiveToinvestigatetheeffectsofinsulinlikegroicreperfusioninrats.MethodsAmiddlecerebralarteryocclusion/reperfusion(MCAO/R)modeladein28healthymaleadultCAO/Ranimalsappearreddifferentext

3、entofneurofunctionalimpairment.Recoverystartedfromthe3rddayafterreperfusion,itssignificantimprovementon7thday.TheexpressionsofIGF1andIGF1Rlastedfor12h-7daysafterreperfusion,reacheditspeakfor1-3days,ephase.ConclusionTheearlyexpressionsofIGF1andIGF1Rmightenhancetheneurofunctionalrecov

4、eryaftercerebralischemicreperfusion.　　［KEYCAO/R）模型。模型成功的标志：动物苏醒后出现左侧Horner征、右侧以前肢为重的偏瘫，爬行时向右侧划圈。假手术组除不插线外，其余步骤同实验组。实验中出现呼吸困难、出血过多、死亡以及术后2h仍不能苏醒的动物弃去不用，并另选动物补足4只。　　1.2神经行为功能测试　　各组动物分别于脑缺血再灌注后6h、12h、24h、3d、7d、14d按BEDERSON评分法评分[3]。　　1.3标本的采集和处理　　各组大鼠按规定的再灌注时间点取材，假手术组于术后24h取材。以100g/L水合氯醛（300

5、mg/kg）腹腔注射麻醉动物，用40g/L甲醛溶液经心脏灌注固定，断头完整取脑，置于40g/L甲醛溶液后固定2h，蒸馏水浸泡4h。切取视交叉后方约5mm的脑组织，常规脱水、透明、石蜡包埋。自视交叉后缘开始连续冠状切片（厚度5μm），每隔10张抽取1张，贴于多聚赖氨酸处理的玻片上，晾干备用。甲苯胺蓝染色尼氏体呈深蓝色，核染色呈淡蓝色，背景浅淡。　　1.4免疫组化染色　　兔抗大鼠IGF1和IGF1R单克隆抗体由武汉博士德生物工程有限公司提供，链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶连接法（SP）免疫组化试剂盒由北京中山生物技术有限公司提供。标本切片常规脱蜡、水化，按试剂盒提供的实

6、验步骤操作，DAB显色，光镜下观察，胞浆出现棕色颗粒为阳性着色。高倍镜下（400倍）在皮质区和纹状体区随机各取4个视野计数阳性细胞，结果以±s表示。　　1.5统计学分析　　采用SPSS11.0软件进行统计学分析，组间比较采用t检验。　　2结果　　2.1神经行为功能评分　　假手术组动物神经功能评分均为0分（无神经损伤症状），脑缺血再灌注后各组动物均出现不同程度的神经功能缺损，评分为1～3分。从时间上来看，再灌注6h～1d神经功能缺损明显，从再灌注3d开始，各组动物神经功能逐渐恢复，评分逐渐减少，脑缺血再灌注后7、14d神经功能评分与再灌注6h相比较，差异有显著意义（t=5

7、.172、3.846,P<0.05）。见表1。　　2.2甲苯胺蓝染色检查　　假手术组脑组织神经细胞形态结构正常、排列均匀，呈卵圆形或多边形，细胞浆尼氏体呈深蓝色，细胞核呈均匀淡蓝色。脑缺血损伤区神经细胞出现核固缩、不规则，细胞周围出现明显的周隙，染色加深呈紫蓝色，核仁消失，并有许多散在的细胞碎片（图1、2）。　　2.3IGF1表达　　假手术组脑组织可见少量着色较浅的IGF1阳性细胞。缺血再灌注6h后脑皮质区和纹状体区IGF1阳性细胞数开始增加（图3），从再灌注12h～7d一直持续高表达，其中以再灌注1～3d最高，与假手术组比较