老龄大鼠脑缺血再灌注细胞凋亡及相关基因表达和脑脉通对其影响

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1、中文摘要中文摘要缺血性脑血管病是老年人常见病，随着老年人口的增多及老龄化社会的到来，发病人数将迸一步增加。其病理基础与缺血后引起的神经元坏死和迟发性神经元死亡密切相关。其治疗主要是溶栓、应用神经保护剂(包括谷氨酸拮抗剂、钙通道阻滞荆等)、外科治疗等，虽然取得了一定疗效，但因缺乏满意效果或安全性使其临床应用受到限制。新的神经保护剂正在试验中。中医认为正虚血瘀，浊毒内蕴是老年缺血性卒中发生的前提，肝风旋动，挟浊毒损伤脑络是老年脑缺血损伤的发展的关键；解毒降浊、益气活血法是治疗老年脑缺血／再灌注损伤的主要方法。而

2、目前中医药、西医药及中西医结合方法防治缺血性脑血管病的实验研究中多以青年动物为对象，忽视了人类脑血管疾病中增龄因素的重要性。这对于探讨老年缺血性脑血管病病理生理特点及用于指导临床防治方面有一定的差距。因此，本课题以老龄大鼠脑缺血／再灌注后神经细胞凋亡的特征、细胞凋亡调控基因表达变化及其与中医气虚血瘀，浊毒损络的关系为研究的切入点，周“益气活血”、“解毒降浊”的脑脉通进行干预以阻断缺血损伤因果转换、恶势循环，保护神经细胞。采用大脑中动脉栓塞(线栓)致缺血3h、再灌注3h、6h、12h、24h、72h为模型，用

3、病理形态学、免疫组织化学法、免疫荧光法、分子生物学技术等实验方法，从整体、细胞、分子、基因表达水平上，动态观察不同时间点青年与老龄大鼠脑缺血／再灌注后神经细胞凋亡的特征及凋亡调控基因表达的异同，并进一步研究了脑脉通对老年脑缺血／再灌注后神经细胞凋亡及凋亡调控基因表达的影响。主要实验内容与结果如下。1老龄大鼠脑缺血／再灌注后神经细胞凋亡特征及脑脉通的保护作用应用整体观察包括神经功能评分、脑组织含水量、梗塞面积等及一般形态学方法包括HE染色、尼氏染色、透射电镜，琼脂糖凝胶电泳等技术对比研究了老龄与青年大鼠脑缺血

4、／再灌注后不同时间点整体和形态学变化特征的异同及脑脉通对其影响．结果发现老龄大鼠容易遭受缺血／再灌注损伤，其损伤出现的时间早，损伤程度重，缺血损伤后梗塞面积大，其损害可随着缺血及再灌注时间的延长而加重，凋亡细胞数、凋亡小体呈现先少再多后少的变化规律，坏死细胞数随再灌注时问延长而增加。缺血性损伤发生不可逆时，在损伤中心区有坏死细胞增多，凋亡细胞减少，这些特征可能与增龄导致的细胞衰老有关。脑脉通中、大剂量可明显改善脑缺血／再灌注所致的神经元损伤，表现为改善神经功能、减轻脑组织含水量、缩小梗塞面积、减轻神经细胞损

5、伤，保护神经元。其可能机理是合成自身修复所老黔丈夔整疑A／辱灌谊船藏撰亡获穗美基嚣表述套齄辕遥对冀彩鸭需鲍肉源性蛋白，从而有利于神经元的修复；或可保护神经胶璇细胞及血管妇皮细魏，上谣整形获爱躯跑筑活偬获态，焉露稻子神经元翡修复。邀垫作糯可箍与其益气欹正，解毒降浊的作用有关。2老筏夫羲簸姨盆7霉灌藏菇辨羟缸邃麓亡墓鏊焱迭翡蹙耗及瓣赫逶对箕诵带捧用。畿致餐上逑结卷麓基键上；遴一步蛊逶免疫筑织毽举法、兔疫荧光法、分子生物学等实验方法，动态观察了不同时间点青年与老龄大鼠脑缺血／再灌注后神经细胞凋亡调控基因表达的异网

6、及脑脉通对其影响。结果如下。2．1老龄大鼠脑缺血／再灌注后细胞膜Fas、Fasl的表达及脑脉通的作用藏缺盘蓐Fas、Fast臻表嫒盘器}妻定瑟亡翡蟹缒上表达，敬半跨喾嚣袭运簸强，缺血中心区及周边区亦可见弱表达；Fas、Fas1均随蒋灌注时间的延长而表达增强。老龄大鼠Fas、Fasl袭达的增强时闻均较青年大鼠譬，其商表达持续时湖较长。雅藤逶鼯毒洚蘧，可菹下溪Fas、i&sl舔表逮，瑰箍稚裁缎憨疆亡畿爱耄，其效果等同于尼莫地平。2。2老簧太筑耱缺氲，再灌滚爱蟹鹣装Bet-2，Bax镪表逡及熬躲逶秘谗两老年脑缺血

7、后Bcl一2可见弱阳性表达，但其泉达无时间规律性。费年大鼠脑袋盘器BeI-2逡呈全箍缝蹭盔，激簸盎摄饶懿舞强，并淹着缺盘醅漏稳廷长先舞后降，萎再灌注72h时与假手术组比较无明摄差异，其与缺血后鲫胞凋亡成负相关。靠年或老龄大鼠脑缺妇／再灌注后诱发Bax持续袭达，其表达等鳃胞凋亡成正趣关。老龄大筑Bax袋送萄瓣强靖弼及商跨酹阊筠较青年必鬣早，其高袭送持续时间较长。Bcl一2是抑制凋亡的基因，Bax是促进凋亡的基鞭，表达Bcl-2的细胞其影态多正紫，袭送Bax翡缎缝其影惫多舅喾。老年整块敷秀灌浚基器01-2骜稳表

8、达或不表达及Bax的早表达和高表达可能与增龄导致的内源性保护能力降低有关，从而谈老年胞缺血后神经元损伤较费每大鼠重。酗脉通益气挟正，解毒降浊可以上调Bcl一2的表达，抑制Bax基图表达，对缺血神经元有保护作用。其对缺血前期的保护效应等同于尼莫地平，晚期的保护效应彳竞亍悫荚缝子。2．3老龄大鼠脑缺血／再灌渡后caspase-3活性变化及麟脉逼的作用Caspase-3是缺盥詹神经细胞满亡的关键蛋翻酶，其活性与缺血后神