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《脑心康片对脑缺血大鼠细胞凋亡相关蛋白p53表达的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、脑心康片对脑缺血大鼠细胞凋亡相关蛋白p53表达的影响?84?中医药信息InformationonTmditionalChineseMedieine2009年第26卷第3期Vo1.26,No.3,2009脑心康片对脑缺血大鼠细胞凋亡相关蛋白P53表达的影响白云,苏慧,苏云明(黑龙江中医药大学,黑龙江哈尔滨150040)摘要:目的:观察脑心康片对局灶性脑缺血大鼠的神经保护作用,并进一步探讨其作用机制.方法:采用线栓法阻断大鼠一侧大脑中动脉(MCAO)制备局灶性脑缺血模型,观察脑心康片对MCAO模型大鼠脑缺血后
2、24,48,72h神经功能缺损导致的行为学变化,并以免疫组化法检测其对上述三个时间点大脑皮质细胞凋亡相关蛋白P53表达的影响,以此探讨脑心康片抗细胞凋亡及对脑缺血的神经保护作用.结果:脑心康片能抑制MCAO模型大鼠大脑皮质P53蛋白表达.结论:脑心康片对大鼠局灶性脑缺血具有保护作用,其机理可能与脑心康片影响凋亡相关蛋白P53的表达有关.关键词:脑缺血;脑心康片;细胞凋亡;P53中图分类号:R285.5文献标识码:A文章编号:1002—2406(2009)03—0084～03脑血管疾病是神经系统的常见病,多
3、发病,是目前引起人类死亡的三大疾病之一.缺血性脑卒中是多种原因引起的一种临床病理状态,其脑组织损害是产生临床征象的病理基础.在本病的预防,治疗和康复方面,中医药具有较为显着的疗效和优势¨j.临床应用脑心康片治疗脑缺血,取得满意疗效.本课题旨在通过对大鼠脑神经损伤的行为学改变,凋亡相关基因P53表达的观察,探讨脑心康片对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用及其作用机制.现报道如下.1实验材料1.1动物Wistar大鼠,雄性,体重(300±20)g,由黑龙江中医药大学实验动物中心提供,动物许可证号:黑动字P0010
4、1004.大鼠自由进食,饮水,手术前12h禁食,不禁水.1.2药品与试剂脑心康片(由蝙蝠葛酚性碱50%,水蛭素50%组基金项目:黑龙江省中医管理局指导课题(2008);2005年黑龙江省攻关课题(GC05C31403);2007年哈尔滨市优秀学科带头人基金(4040282)作者简介:白云(1974一),女,讲师,现为黑龙江中医药大学2006级中西医结合基础专业博士研究生.通讯作者:苏云明(1949一),男,教授,博士研究生导师,主要从事中药现代药理学研究.收稿日期:2008—09—10修回日期:2008—
5、09—29成,黑龙江中医药大学实验中心制备);尼莫地平片(天津中央药业有限公司生产);银杏叶片(唐山荣大药业有限公司生产);p53抗体(美国SANTACruz公司生产);PV6001二步法检测试剂盒(北京中杉金桥).1.3实验仪器YT一6生物组织摊烤片机(湖北);生物组织包埋机(湖北孝感);DGX一9143B一1电热鼓风干燥箱(上海福玛);光学显微镜(OlympusJapanBH一2);Q5O0IW图像分析仪(德国Leica).2实验方法2.i分组及给药方法Wistar雄性大鼠随机分成脑心康片高,中,低剂
6、量组,西药阳性对照组,中药对照组,模型对照组及假手术组,除假手术组24只外,其余每组30只大鼠.其中脑心康片高剂量组给予脑心康片100mg?kg一;脑心康片中剂量组给予脑心康片5Omg?kg～;脑心康片低剂量组给予脑心康片25mg?kg～;西药阳性对照组给予尼莫地平片21.6mg?kg～;中药阳性对照组给予银杏叶片135mg?..;模型对照组及假手术组给予等容积生理盐水.各组均灌胃给药,连续7天,在末次给药30min后,对大鼠实施右侧大脑中动脉阻塞模型手术.2.2右侧大脑中动脉阻塞(MCAO)模型制作采用
7、稍加改良的Longa…方法,将Wistar大鼠制备MCAO模型.MCAO术后(大鼠意识恢复后30min)对脑缺血大鼠神经功能缺陷进行评分,MCAO术后计2009年第26卷第3期Vo1.26,No.3,2009中医药信息InformationonTraditionalChineseMedicine?85?分在1～3分者纳入研究.2.3脑组织P53蛋白含量测定行为学检测完毕后,用10%水合氯醛麻醉(350mg?kg),快速开胸暴露心脏,剪开右心耳,经左心室插管至升主动脉内,于5min内快速灌注150ml左右肝
8、素化生理盐水,随后滴注含4%多聚甲醛的0.1mol?L磷酸缓冲液200ml,缓慢灌注并固定.灌注完毕,从枕骨大孔剪开,完整取脑,在相同固定液中4℃固定不超过48h.再制作病理组织片;以PV一6001二步法操作,终止反应后,苏木素复染,清水冲洗返蓝,梯度乙醇脱水,二甲苯透明,中性树脂封片观察.2.4图像分析阳性细胞数计数方法:400倍光镜下在缺血梗死灶周边区皮质选择5个不重叠的视场,计数阳性染色的细胞数,取其平均值.2.5统计学
