蝙蝠葛酚性碱对脑缺血大鼠细胞凋亡相关蛋白pkb表达的影响

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1、蝙蝠葛酚性碱对脑缺血大鼠细胞凋亡相关蛋白PKB表达的影响：杜永强，白云，赵大卓，姜波，苏云明【摘要】目的：探讨蝙蝠葛酚性碱（phenolicalkaloidsfromMenispermumdauricum，PAMD）预处理对脑缺血后大脑皮质细胞凋亡蛋白激酶B(proteinkinaseB,PKB)表达的影响。方法：采用线栓阻塞大脑中动脉方法制备大鼠脑缺血模型，并用受试药物术前连续预处理模型大鼠7d。采用免疫组织化学方法测定假手术组，模型组，PAMD高、中、低剂量组，尼莫地平、银杏叶片预处理组大鼠缺血后24，48

2、，72h大脑皮质中细胞凋亡相关蛋白PKB表达变化。结果：行大脑中动脉闭塞后大鼠大脑皮质PKB均被诱导表达，PAMD预处理7d后，缺血后各时间点大鼠大脑皮质PKB表达明显升高。结论：PAMD能明显促进缺血脑损伤后抑制细胞凋亡相关蛋白PKB表达水平，从而在缺血性脑损伤中起到神经保护作用。【关键词】脑缺血；蝙蝠葛酚性碱；细胞凋亡；蛋白激酶B［Abstract］Objective:StudyandexploretheexpressofgeneandproteinofproteinkinaseB(PKB)aboutcer

3、ebralischemiaeffectsofphenolicalkaloidsfromMenispermumdauricum（PAMD）oncerebralischemiainrats.Methods：InordertoobservetheneuroprotectiveeffectofPAMDoncerebralischemia,theratsiaiddlecerebralartery(MCA)andthenia.TheeffectsofPAMDonproteinexpressionofPKBmunohisto

4、chemicalmethod.Results：ThePKBeafterexecutedbyPAMDfor7days.Conclusion：PAMDpromotedtheexpressofcellapoptosisproteinPKBiainjuredandhadprotectingeffectoncerebralischemia.［Keyia；phenolicalkaloidsfromMenispermumdauricum；cellapoptosis；proteinkinaseB脑血管病（CVD）是中老年人的常

5、见病、多发病、疑难病，以其高发病率、高致残率、高死亡率受到国内外重视，成为中西药物治疗研究的热点领域。脑血管疾病中，缺血性脑血管病（ICVD）占了大部分，严重危害着人类的健康。脑缺血后神经元的死亡包括坏死和凋亡两种方式，脑功能的损伤程度与缺血程度及时间呈正相关，严重缺血的中心区以坏死为主，周边区(半暗带)的迟发性神经元死亡(delayedneuronaldeath,DND)则以凋亡为主［1］。自1991年蛋白激酶B(proteinkinaseB,PKB)被克隆以来，虽然PKB的研究工作己经展开，但仍有许多问题尚

6、未阐明。PKB在细胞生长、代谢、凋亡中扮演了很重要的角色［2］。PKB研究的另一个方向就是以它作为分子基础，寻找治疗糖尿病、恶性肿瘤、神经退行性疾病的药物［3,4］。蝙蝠葛酚性碱（phenolicalkaloidsfromMenispermumdauricum，PAMD）是从中药北豆根中提取的多种脂溶性生物碱的混合物，主要含有蝙蝠葛碱（dauricine，Dau）和蝙蝠葛苏林碱（daurisoline，DS），其他成分含量甚微。近年来，对PAMD的药理作用及其机制进行的大量研究，主要集中在对心血管系统的作用、对

7、脑缺血及缺血再灌注损伤的保护作用、抗肿瘤等作用研究上。本研究建立大脑中动脉闭塞（MCAO）大鼠模型，通过观察PAMD对细胞凋亡相关蛋白PKB表达的影响来阐明其对ICVD的预防作用，为临床进一步阐明脑缺血损伤的机制和保护脑组织奠定基础，同时也为PAMD的新药开发及临床应用提供理论基础和实验依据。1材料与方法1.1药品及主要试剂PAMD由黑龙江中医药大学药学院王栋教授提供，用时先以1mol/L　HCl溶解后，再用1mol/L　NaOH调pH值至中性，加蒸馏水至所需浓度。尼莫地平片(西安博爱制药有限公司，批号：国药准

8、字H61020545)；银杏叶片(唐山荣大药业有限公司，批号：国药准字Z20027958)；12.5Ｕ/μl肝素（上海生化）；水合氯醛（昆山）；低聚甲醛（天津）。1.2仪器设备YT6生物组织摊烤片机（湖北）；生物组织包埋机（湖北孝感）；DGX9143B1电热鼓风干燥箱（上海福玛）；光学显微镜（OlympusJapanBH2）；Q500ID高、中、低剂量组，西药阳性对照组，中药阳