耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的基因多态性分型研究

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1、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的基因多态性分型研究【摘要】目的探索一种准确、快速、可靠的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的分子生物学分型方法，了解医院内MRSA的多态性，为临床合理、有效地使用抗生素和控制耐药基因在种群间的传播提供帮助。方法用MecA基因相关高变区PCR扩增(HVR-PCR)和随机扩增多态性DNA(RAPD)两种方法，对MRSA菌株进行多态性分析。HVR-PCR检测MecA基因相关高变区正相重复序列元件(DRUs)的长度，根据DRUs数目的不同对MRSA分型;RAPD根据电泳图谱中条带的数目及位置，经NTSYS统计软件进行聚类分析，得到遗传树状图，按MRSA菌株之间的相关性

2、进行分型。结果应用HVR-PCR方法可将31株MRSA标本分为7型，分别含有7、8、9、10、11、12和16个DRUs，其中10DRUs型最多[11/31(35.48%)]，16DRUs型最少[1/31(3.23%)];应用RAPD分型，31株MRSA共分10型，其中以Ⅳ型为主[10/31(32.26%)]，其他型分布比较接近。在11株HVR-PCR分型的10DRUs型中RAPDⅣ型4株[4/11(36.36%)]，RAPDⅢ型和RAPDⅣ型各2株[2/11(18.18%)];10株RAPDⅣ型中9DRUs型、10DRUs型各4株[4/10(40.00%)]。结

3、论RAPD方法和HVR-PCR方法对MRSA的分型率都比较高，而且这两种方法都比较简单、稳定、可靠、快速，实用性强，具有广阔的应用前景。【关键词】耐甲氧西林金黄色葡萄球菌;MecA基因;随机扩增多态性DNA;MecA基因相关高变区PCR扩增　ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatethepolymorphismsofmethicillin-resistantStaphylococcusaureus(MRSA)inlocalhospitalsinordertoprovideevidenceforclinicaldoctorstousetheantibioticsrat

4、ionallyandeffectively.MethodsRSAethodsofPCRformec-associatedhypervariableregion(HVR-PCR)andrandomamplifiedpolymorphicDNA(RAPD).MRSAstrainstypedbyHVR-PCRaccordingtothelengthpolymorphismsberofdirectrepeatunitelements(DRUs)ofHVR-PCRproducts;GroupingofMRSAbyRAPDongdifferentMRSAisolates.ResultsTotally

5、31MRSAstrainstypedbyHVR-PCRostpredominant,presentin11/31cases(35.48%).Amongthe31MRSAstrainstypedbyHVR-PCR,only1shoinanttypeilardistribution.ConclusionRAPDandHVR-PCRmethodsnotalsopossessagoodabilitytoobtaininterpretableresults,butalsoaresimple,stable,reliableandrapid.Theybothhaveperfectpracticalit

6、yandprospectofextensiveapplication.　　KEYRSA)的分型在国内外均有报道，但这些方法尚未成熟，各地分型标准也不一样，且多采用单一的分型方法。RAPD和HVR-PCR联合应用于MRSA多态性分型尚未见报道。本实验采用RAPD和HVR-PCR两种方法对MRSA菌株进行分型，了解其多态性分布状况、鉴别菌株之间的相关性，为合理、有效地使用抗生素和控制耐药基因在种群间的传播提供理论基础。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1标本实验用的31株MRSA标本于2007年3月至2007年12月间西安交通大学医学院第一、第二附属医院的住院患者。　　1.1.2实验

7、仪器及试剂MicroScanautoScan-4型全自动细菌鉴定分析;药敏试验纸片购自英国OXOID公司，Mueller-Hinton平板由本实验室自行配置;细菌基因组DNA提取试剂盒(DP302)、PCR试剂2×TaqPCRMasterMix(含染料)、DNAMarkerⅡ均购自北京TIANGEN生物技术有限公司;溶菌酶(活力单位>2000u/mg)、蛋白酶K购自Amrescos生物公司;金黄色葡萄球菌mecA基因PCR检测