浅析对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的基因多态性分型研究

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1、浅析对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的基因多态性分型研究【摘要】目的探索一种准确、快速、可靠的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的分子生物学分型方法，了解医院内MRSA的多态性，为临床合理、有效地使用抗生素和控制耐药基因在种群间的传播提供帮助。方法用MecA基因相关高变区PCR扩增(HVR-PCR)和随机扩增多态性DNA(RAPD)两种方法，对MRSA菌株进行多态性分析。HVR-PCR检测MecA基因相关高变区正相重复序列元件(DRUs)的长度，根据DRUs数目的不同对MRSA分型;RAPD根据电泳图谱中条带的数目及位置，经NTSYS统计软件进行聚类

2、分析，得到遗传树状图，按MRSA菌株之间的相关性进行分型。结果应用HVR-PCR方法可将31株MRSA标本分为7型，分别含有7、8、9、10、11、12和16个DRUs，其中10DRUs型最多[11/31(%)]，16DRUs型最少[1/31(%)];应用RAPD分型，31株MRSA共分10型，其中以Ⅳ型为主[10/31(%)]，其他型分布比较接近。在11株HVR-PCR分型的10DRUs型中RAPDⅣ型4株[4/11(%)]，RAPDⅢ型和RAPDⅣ型各2株[2/11(%)];10株RAPDⅣ型中9DRUs型、10DRUs型

3、各4株[4/10(%)]。结论RAPD方法和HVR-PCR方法对MRSA的分型率都比较高，而且这两种方法都比较简单、稳定、可靠、快速，实用性强，具有广阔的应用前景。【关键词】耐甲氧西林金黄色葡萄球菌;MecA基因;随机扩增多态性DNA;MecA基因相关高变区PCR扩增ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatethepolymorphismsofmethicillin-resistantStaphylococcusaureus(MRSA)inlocalhospitalsinordertoprovideevidenceforc

4、linicaldoctorstousetheantibioticsrationallyandanalyzedthepolymorphismsofMRSAwiththemethodsofPCRformec-associatedhypervariableregion(HVR-PCR)andrandomamplifiedpolymorphicDNA(RAPD).MRSAstrainstypedbyHVR-PCRaccordingtothelengthpolymorphismswhichdecidedbythenumberofdirectrepeatun

5、itelements(DRUs)ofHVR-PCRproducts;GroupingofMRSAbyRAPDwasbasedonthedependabilityamongdifferentMRSAMRSAstrainstypedbyHVR-PCRweredividedintotypeswhichcontained,,,10,11,1and1DRUs.MRSAstrainswith10DRUsweremostpredominant,presentin11/31cases(%).Amongthe1MRSAstrainstypedbyHVR-PCR,o

6、nly1showed1DRUs.Therewere10typesclassedbyRAPDofallMRSAdominanttypewasRAPDⅣ,presentin10/31cases(%).TheothersshowedsimilarandHVR-PCRmethodsnotalsopossessagoodabilitytoobtaininterpretableresults,butalsoaresimple,stable,reliableandrapid.Theybothhaveperfectpracticalityandprospecto

7、fextensiveapplication.KEYWORDS:methicillin-resistantStaphylococcusaureus;mecAgene;randomamplifiedpolymorphicDNA;PCRforthemec-associatedhypervariableregion葡萄球菌的分型方法很多，传统的分型方法包括血清学分型、抗生素分型等，但均无法满足精确辨别的要求。分子生物学技术的出现为这一领域带来了革命。目前，分子分型方法已成为研究细菌耐药性发生及传播的重要手段，常见的有：脉冲场凝胶电泳(pulsed-fie

8、lgelelectrophoresis,PFGE)，随机扩增DNA多态性(randomamplifiedpolymorphicDNA,R