耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的基因分型的研究

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1、中本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有论文作者签一切相关责任。期：趁竺：￡彤中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学

2、。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名指导教师签名日期目录一、摘要中文论著摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。l英文论著摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3二、英文缩略语⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯．6三、论文前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7日U看⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。，材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．9实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．12讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．16结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．19四、本研究创新性的自我评价⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．20五、参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．21六、附录综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．：⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．34个人简介⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35区MRSA的防治提供依据。方法1、菌株选取：收集2007年1月．2008年8月间辽宁省五家教学医院(中国医科大学附属一院，中国医科大学盛京医院，辽宁省人民医院，大连市中心医院，大连医科大

5、学附属一院)门诊及住院患者非痰标本分离的MRSA菌株104株。2、SCCmec基因分型：用PCR方法扩增mec复合物及ccr复合物各基因组分，产物经电泳成像后初步判断其片段大小，并将产物送上海生工生物技术有限公司纯化并进行双向测序后进行BLAST对比分析，明确SCCmec基因型。3、杀白细胞毒素(PVL)：PCR方法扩增特征基因，经测序后上网比对确证。4、多位点序列分型(MLST)：以7个管家基因的PCR片段序列分析为基础，产物经纯化后进行双向测序，直接将结果提交数据库(http：／／www．mlst．net)

6、进行比较，比较每个多态性位点的等位基因，获得序列号(ST)，与已知的MRSA流行株进行比较和分析。5、葡萄球菌A蛋白基因多态性分析(spa)：PCR方法扩增葡萄球菌的表面蛋白X区，测序结果与数据库(http：／／www．ridom．de／spa．server／)中公布的碱基重复序列进行比较，根据排列方式及次数确定MRSA的型别。结果1、SCCmec基因分型：辽宁地区分离的MRSA以SCCmecII、Ⅲ型为主，分别占本次分离的50％和45．2％，其中，中国医科大学附属一院MRSA感染以SCCmecIII型为主，占

7、该院院分离株的61．8％，其他四家教学医院则以II型占优势，大连医科大学附属一院MRSA菌株SCCmecII型为100％。同时，在沈阳地区发现5株社区MRSA(SCCmeclVMRSA3株，分离于中国医科大学附属一院；SCCmecV型菌株2株，中国医科大学附属一院和盛京医院各l株)。2、PVL毒素：只有3株SCCmeclV型社区MRSA菌株PVL毒素为阳性，其余101株MRSA均为阴性。3、MLST分型：挑选25株MRSA进行MLST分型(SCCmecII型7株，SCCmecIII型13株及5株CA．MRSA)

8、，结果HA．MRSA以ST239为主，其次为ST5，CA．MRSA主要为ST59型，其次为S”，有1株CA．MRSA未能成功进行基因分型。4、spa分型：中国医科大学附属一院以t030为主，占该院分离率的56．4％，盛京医院以t570、t030为主，分别占该院分离率的33．3％，大连医科大学附属一院t002占该院分离率的86．7％，大连市中心医院t002占该院分离率的66．7％，辽宁省