美金胺对缺血性脑损伤保护作用的研究

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1、美金胺对缺血性脑损伤保护作用的研究【摘要】目的观察美金胺对SD雄性大鼠全脑缺血/再灌注后海马CA1区锥体细胞的保护作用，并研究其可能的机制。方法采用四动脉结扎法建立大鼠全脑缺血模型，缺血15min后分别灌注6h或5天。大鼠随机分为假手术组、缺血/再灌注组、缺血/再灌注给药组和缺血/再灌注溶剂对照组。缺血/再灌注给药组腹腔注射20mg/kg美金胺。使用免疫印迹、免疫沉淀和焦油紫染色法等技术检测相关信号蛋白的表达、活化水平及神经元细胞的死亡。结果大鼠缺血/再灌注5天后，缺血/再灌注给药组海马CA1区细胞的存活数量较缺血/再灌

2、注组和缺血/再灌注溶剂对照组明显增加；缺血/再灌注6h，缺血/再灌注给药组N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体亚基2A(NR2A)、突触后密集区蛋白95(PSD-95)、非受体型蛋白酪氨酸激酶(Src)三者间免疫沉淀的蛋白量及NR2A的酪氨酸磷酸化水平较缺血/再灌注组和缺血/再灌注溶剂对照组明显降低，而三者的表达量没有明显变化。结论美金胺通过抑制NR2A、PSD-95、Src三者结合及Src介导的NR2A的酪氨酸磷酸化抑制了缺血后NMDA受体功能的增强，从而对大鼠缺血性脑损伤有保护作用。【关键词】脑缺血/再灌注美金胺

3、NMDA受体NR2ASrcAbstract:ObjectiveToevaluatetheneuroprotectionofmemantineagainstcerebralischemiainSDratmodels,andinvestigatetheunderlyingmechanism.MethodsRatslyassignedto4groups:sham-operationgroup,ischemia/reperfusiongroup,vehiclecontrolgroupanddrugtestgroup.Transi

4、entbrainischemia(15min)andreperfusionethod(4-VO).TheexperimentedbyusingIB,IPandmorphologicmethodstoexaminetheexpressionofrelevantmessageproteinsandthesurvivalofhippocampalneurons.ResultsTransientcerebralischemia/reperfusioninducedobviousneuronaldeath,provedbytheu

5、seofmemantine.Itemantineinhibitedtheinteractionsbetemantineagainstcerebralischemic/reperfusiondamagearepathologicallyconfirmedinSDratsmodels.AndthemechanismmayinvolvethetyrosinephosphorylationofNR2AbySrc.Keyia/reperfusion;memantine;NMDAreceptors;NR2A;Src近年来脑缺血损伤的

6、发病机制被认为主要是N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体的兴奋毒作用。研究报道NMDA受体的非竞争性拮抗剂美金胺(memantine)可以抑制NMDA受体在病理条件下的过度增强，其作用与阻滞通道过度开放有关［1］，但其作用的具体机制仍没有充分阐明。本实验采用大鼠全脑缺血/再灌注模型研究美金胺对脑缺血的神经保护作用，并探讨其可能的作用机制。1材料和方法1.1实验动物清洁级雄性Sprague-Da)、缺血/再灌注组(ischemia/reperfusion,I/R)、缺血/再灌注溶剂对照组(Saline)、缺血/再灌注给

7、药组(Memantine)。1.2实验方法1.2.1动物模型制备按本实验室已建立的大鼠四动脉结扎模型，动物以20%水合氯醛(300～350mg/kg)腹腔注射麻醉后，分离双侧颈总动脉，电凝椎动脉。手术第2天动物于清醒状态下结扎双侧颈总动脉，全脑缺血15min，再灌注6h或5天。缺血后立即给予腹腔注射药物或溶剂，以体征表现判断缺血模型的可靠性［2］。假手术组不结扎双侧颈总动脉。1.2.2给药美金胺溶于生理盐水中，缺血/再灌注给药组在缺血后立即腹腔注射给药20mg/kg；溶剂对照组给予等体积生理盐水。1.2.3样品制备大鼠再

8、灌注6h后，断头快速取脑，分离双侧海马，沿海马裂将其CA1部分分离出来，置液氮中冻存备用。以下操作均在冰水浴中进行：从液氮中取出海马加匀浆缓冲液，用Teflon匀浆器高速匀浆（10s×6次），1000g于4℃离心15min，小心移取上清液（主要为海马的胞质部分），置-80℃冰箱待用。1.2.4蛋白浓度测定采用改良Lo