丁苯酞对癫疒间小鼠保护作用的研究

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1、丁苯酞对癫疒间小鼠保护作用的研究【关键词】丁苯酞;癫疒间;ATP酶;抗氧化丁苯酞(butylphthalide，NBP)是我国国家一类新药，其发挥神经保护作用的靶点比较广泛，可作用于脑缺血病理机制的多个环节，不良反应较小[1]。而将其脑保护作用应用于癫疒间的研究经网络检索尚未见报道。本实验通过研究丁苯酞对癫疒间小鼠脑内抗氧化指标的影响，探讨其对癫疒间的作用及可能机制。1材料和方法1.1药品聚乙二醇400(PEG400，上海试剂总厂)，丁苯酞胶囊(石药集团恩必普药业有限公司，批号080722;30%PEG400溶解丁苯酞至各组所需浓度)，地西泮注射液(江

2、苏济川制药有限公司，批号080429)，戊四唑(Bioszune公司，批号200802)，丙二醛(malonaldehyde，MDA)、总超氧化物歧化酶(totalsuperoxidedismutase，T-SOD)、总抗氧化能力(totalantioxidativecapability，T-AOC)和ATP酶试剂盒(均购自南京建成试剂公司)，双蒸水。其他试剂均为分析纯。1.2仪器752紫外可见分光光度计(上海第三分析仪器厂)，低温高速离心机(eppendorfAG，Centrifuge5804R)，FA25超声匀浆机(上海弗鲁克流体机械制造有限公司)

3、，自动双重纯水蒸馏器(型号SZ-93，上海亚荣生化仪器厂)，梅特勒托利多AE240电子天平(1/100000，瑞士MettlerToledo)。1.3动物健康昆明种小鼠，体重20~30g，雌雄各半，徐州医学院实验动物中心提供〔SYXK(苏)2007-0037〕。小鼠均以标准饲料喂养，自由摄食、饮水，自然光照射，换气扇通风，室温保持在22℃左右，实验时避免噪声干扰。1.4实验分组与给药按分层随机区组设计，将小鼠分成7组，使各组小鼠的平均体重和性别比例相似，每组14只，分别为生理盐水组(NS组，生理盐水)、溶媒组(PEG组，30%PEG400)、模型组(M

4、G组，30%PEG400+戊四唑)、丁苯酞低剂量组(NL组，0.2g/kgNBP+戊四唑)、丁苯酞中剂量组(NM组，0.4g/kgNBP+戊四唑)、丁苯酞高剂量组(NH组，0.8g/kgNBP+戊四唑)、地西泮组(DG组，2.5mg/kg地西泮+戊四唑)。各组小鼠首先根据分组分别给予相应的生理盐水、30%PEG400、地西泮和不同剂量的NBP;30min后，模型组、地西泮组及各剂量丁苯酞组均给予100mg/kg的戊四唑致疒间。各组小鼠均按0.2ml/10g腹腔注射给药。1.5小鼠脑组织Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase、MDA

5、、T-SOD和T-AOC的检测1.5.1小鼠脑匀浆的制备小鼠致疒间50min后，各组小鼠冰上断头取脑(包括皮质及海马)，在冷生理盐水(4℃)中洗去血液，在滤纸上吸干水分称重，加入适量冷生理盐水，匀浆机匀浆1min以彻底混匀组织液，3500r/min冷冻离心15min，取上清，-70℃保存，待测。1.5.2指标检测考马斯亮兰法测定蛋白含量，通过测定光密度计算蛋白含量;定磷法测定ATP酶;TBA法测定MDA，532nm处有最大吸收峰;黄嘌呤氧化酶法测定T-SOD;比色法测定T-AOC。1.6统计学处理应用SPSS13.0统计软件处理，数据以±s表示，组间比

6、较采用单因素方差分析和q检验，P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1丁苯酞对过氧化指标的影响丁苯酞能明显降低MDA的含量，增强T-SOD及T-AOC的活力，与模型组(MG组)比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。表1丁苯酞对过氧化指标的影响癫疒间的反复发作造成慢性脑缺氧、脑功能障碍，使组织在氧代谢障碍时产生自由基，对脑细胞产生过氧化损伤。细胞膜是最易受自由基攻击的部位之一。自由基反应能引起膜脂质紊乱和脂质过氧化反应，导致细胞水肿，细胞膜构型、结构和对离子通透性的改变，影响Na+、K+等离子的流动，使Ca2+进入细胞内。同时自由

7、基还可引起磷脂降解，从而使ATP酶活性降低，影响细胞间的离子转运而导致神经元胞膜电活动的异常，重摄取GABA和Glu的能力下降[3-6]。因此，MDA、SOD等抗氧化指标及ATP酶活力的变化在一定程度上可以反映丁苯酞防治癫疒间的疗效。本组实验结果提示，丁苯酞对癫疒间鼠脑内MDA、T-SOD及T-AOC的影响均较强，说明它具有较强的抗氧化性，能清除氧自由基，减轻自由基对细胞膜的攻击和脂质过氧化分解产物的生物毒性，对神经细胞具有一定的保护作用。同时，它能通过增强癫疒间鼠脑内Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase的活力，影响Na+、K+

8、、Ca2+和Mg2+的转运，维持细胞内外的离子平衡，稳定膜电位，从而有利于癫疒间的治疗。分析研